Анализ источников. 
Критерии идентификации электрофоретического спектра для целей сортового контроля и сертификации

Относительно растительных систем понятие идентификации подразумевает установление критериев и соответствия отдельного объекта (генотипа, линии, биотипа, сорта) соответствующим справочным данным для известных объектов этого же вида [2]. Для облегчения идентификации, оптимизации ее проведения организуют специальные «банки» (генетические, молекулярные, морфологические и др.), благодаря которым возможно проведение сравнительного анализа и идентификации растительного организма.

Сортовую идентификацию на основе электрофоретического разделения белков, как правило, проводят путем анализа единичных зерен с колоса, растения или в случайной выборке из партии семян. В данном случае размер анализируемой выборки и способ интерпретации результатов электрофореза определяется структурой сорта, которая обусловлена рядом причин и прежде всего способом размножения. В связи с этим способы сортовой идентификации для самоопылителей и перекрестноопыляющихся культур существенно отличаются.

«Сортовая чистота», «подлинность», «оригинальность» — характеристики, для оценки которых пригодны методы, прошедшие всесторонние испытания и зарекомендовавшие себя на практике [3, 4, 5].

Как свидетельствуют имеющиеся данные [4, 5], наиболее распространенной ошибкой в области практического использования метода молекулярных маркеров является смешение понятий «идентификация сорта» и «дифференциация сортов», или их различение. Идентифицировать сорт (генотип, гибрид, линию, клон) — значит гарантированно узнать его с использованием метода в любой ситуации. Для того чтобы идентифицировать сорт, необходимо иметь оригинальные семена всех районированных сортов, каталоги, базы данных спектров, максимально охватывающие генетическое разнообразие культуры или в целом вида, в том числе всех допущенных к использованию сортов [6, 7].

Одним из наиболее важных моментов, который следует учитывать при проведении сортовой идентификации и определении чистосортности семян, является генетическая гетерогенность сортов. Критерием гетерогенности на уровне запасных белков служит отсутствие единообразия белковых спектров в исследуемом образце того или иного сорта [8, 9].

В интерпретации и регистрации (записи) электрофоретических спектров белков существует несколько принципиально различных подходов. Первый основан на определении относительной электрофоретической подвижности (ОЭП) каждого белкового компонента на электрофоретическом спектре анализируемого образца или относительно отдельных «маркерных» компонентов какого-либо стандартного сорта, или относительно компонентов «эталонного» спектра, полученного при электрофорезе смеси белков сортов различных культур [10, 11].

Второй подход основан на знании наследования и генетического контроля запасных белков и заключается в простом визуальном сравнении типов совместно наследуемых компонентов (блоков компонентов), или с эталонным спектром (спектрами) данного сорта, или с каталогом типов блоков компонентов [4, 12].

Международная ассоциация по контролю за качеством семян (ISTA) предлагает использовать в качестве стандарта при записи и интерпретации электрофореграмм анализируемых сортов спектр сорта Atem. Этот стандарт должен присутствовать в каждом опыте (в каждой пластине геля при электрофорезе). Затем рассчитывать относительную электрофоретическую подвижность «наиболее четких компонентов» анализируемых образцов относительно маркерных компонентов стандарта [5].

Методики, разработанные ВИРом [3, 13, 14], предлагают использовать для записи электрофореграмм эталонный спектр, полученный при электрофорезе смеси глиадинов пшеницы, гордеинов ячменя и авенинов овса. Эталонный спектр разделен на зоны б, в, г, ?, и в каждой зоне компоненты пронумерованы. Задача состоит в том, чтобы анализируемые спектры сравнить с эталонным, указать номера совпадающих компонентов, а также отметить их большую или меньшую интенсивность, указать цифровым индексом смещение сравниваемого компонента относительно стандартного.

Для оптимизации процедур идентификации результатов электрофореза активно применяются методы, основанные на использовании цифровых устройств — систем гель-документирования в комплексе с программным обеспечением, денситометров [15, 16, 17, 18]. Однако в данном случае для корректного сравнения полученного результата с «эталонным» уровнем в программный пакет должны быть внесены как можно больше вариантов сочетаний компонентов представителей анализируемого вида, методики должны обладать очень высокой воспроизводимостью результатов.