Конструирование системы экспрессии индуцибельной изоформы синтазы оксида азота в клетках Escherichia coli
Stuehr DJ and Ikeda-Saito M. (1992) Spectral characterization of brain and macrophage nitric oxide synthases. Cytochrome P-450-like hemeproteins that contain a flavin semiquinone radical //J. Biol. Chem. V.267 — P.20 547−20 550. Wu C, Zhang J, Abu-Soud H, Ghosh DK, and Stuehr DJ. (1996) High-level expression of mouse inducible nitric oxide synthase in Escherichia coii requires coexpression with… Читать ещё >
Содержание
- Выводы
1. Сконструированы гетерологические системы экспрессии функционально активной NO-синтазы: JM-109 [pCW-NOS pCAM-JL]- BL-21DE [pCW-NOS pCAM-JL]- BL-21DE [pCW-NOS pCAM-ET] в клетках E.coli. Подтверждено, что синтаза оксида азота активна только при коэкспрессии кальмодулина.
2. Функциональная активность экспрессированной? NOS доказана с помощью спектроскопии СО-восстановленного гемопротеина, детекции образования N0 с помощью реакции превращения оксигемоглобина в метгемоглобин, а также идентификацией молекулы N0 с помощью ЭПР.
3. Определены количественные параметры экспрессии? NOS. Выход фермента при использовании всех трех генетических конструкций составил от 10 до 22 мг/л культуральной среды, а удельная активность от 0,42 до 0,64 U/мг белка. Эти цифры совпадают с ранее опубликованными данными других авторов.
4. Установлено, что экспрессированная нами? NOS связана с мембранной фракцией клеток, при этом в 105 ОООхд — супернатанте активность фермента не обнаружена. Этот факт не совпадает с имеющимися сведениями о локализации? NOS, в том числе и экспрессируемой в гетерологических системах. Тем не менее, взаимодействие? NOS с мембраной не повлияло на ферментативную активность.
5. В геноме лягушки Xenopus Laevis обнаружены неканонические нуклеотидные последовательности, кодирующие кальмодулин. Одна них была использована для конструирования вектора экспрессии для кальмодулина.
6. В ходе выполнения исследования разработана новая улучшенная схема сушки белковых гелей, которая может быть рекомендована к широкому использованию в связи с высокой экономичностью, простотой и доступностью метода для практически любой лаборатории.
Заключение
Установление физиологической роли простейшего химического соединения, N0,-является, по-видимому, одним из крупнейших событий в биологии за последнее десятилетие. Это вещество непрерывно синтезируется ферментативным путем в организме животных и человека, выполняя функции одного из универсальных регуляторов метаболизма. Фермент, продуцирующий основную часть N0, синтаза оксида азота, уникальна по сложности организации и включает самые разнообразные кофакторы: FAD, FMN, ВН4, гем, СаМ, Zn2+ и, по крайней мере, три в высшей степени непохожих субстрата — L-аргинин, кислород и NADPH. Проведенные в последние годы интенсивные позволили достаточно полно изучить особенности строения и функционирования NOS. Опубликовано огромное количество работ, посвященных биохимическим, физиологическим и фармакокинетическим эффектам, вызываемым N0. Тем не менее, до сих пор нет полной ясности в понимании как физиологической роли N0, так и механизмов ферментативного катализа NOS. Достаточно упомянуть, что последний из кофакторов был найден только в 1998 году, через десять лет после открытия и описания фермента.
В тексте данной диссертации вполне уместно упомянуть отечественные научные школы, занимающиеся проблемами N0 и NO-синтаз. Прежде всего необходимо отметить проф. А. Ф. Ванина, в сфере научных интересов которого такие вопросы как формы стабилизации и транспорта оксида азота в биологических системах. Работы А. Ф. Ванина, посвященные исследованию методом ЭПР в тканях животных парамагнитных нитрозильных комплексов гемового и негемового железа,
85 предшественником которых является N0, выходили в свет в конце 60-х начале 70-х годов. Таким образом, А. Ф. Ванина можно назвать одним из первооткрывателей биологической роли N0.
Среди Российских ученых необходимо отметить также проф. В. П. Реутова, занимающегося исследованием метаболизма и физиологической роли N0. Так, В. П. Реутов постулировал существование цикла оксида азота в организме млекопитающих. Этот цикл образуют две компоненты — NO-синтазные и нитритредуктазные реакции: L-аргинин -" N0 -" N027N03″ →¦ N0. В институте биомедицинской химии РАМН проф. Н. С. Северина занимается исследованиями растворимой гуанилатцикпазы как промежуточного звена в молекулярном механизме физиологических эффектов оксида азота.
В 1998 году вышел номер журнала «Биохимия», целиком посвященный исследованию N0 и NO-синтаз. Необходимо отметить, что молекулярно-биологические аспекты функционирования NO-синтаз освещались в этом сборнике авторами из Австрии [5] и лишь частично — A.A. Недоспасовым [9] в фундаментальном обзоре, посвященном конкурирующим реакциям в биосинтезе N0 и во взаимодействии его с мишенями. Вообще, надо отметить, что почти не встречается работ Российских научных коллективов, занимающихся проблемами энзимологии NO-синтаз. Таким образом данная диссертационная работа, посвященная созданию высокоэффективной системы экспрессии NO-синтазы, действительно является значимой для Российской науки. Разработанная и успешно апробированная впервые в России эффективная система экспрессии позволяет осуществить исследования по изучению структурно-функциональных свойств как нативных, так и мутантных форм? NOS. С помощью этой бактериальной системы экспрессии возможна наработка
86 функционально активной NO-синтазы в препаративных количествах и при небольших материальных затратах.
В процессе выполнения работы получены два интересных факта: обнаружен полиморфизм гена, кодирующего СаМ, в ооцитах лягушки Xenopus Laevis, а также отмечена не цитозольная локализация фермента? NOS при экспрессии в клетках E.coli. Очевидно, для того, чтобы эти факты стали научными результатами, необходимо более тщательное их исследование, что, к сожалению, оказалось невозможным осуществить в рамках данной работы.
Как уже упоминалось, СаМ представляет собой высококонсервативный белок, имеющий идентичное строение у всех позвоночных [1]. Тем более невероятно, чтобы у одного организма обнаружилось две изоформы СаМ, отличающиеся одна от другой на три аминокислоты. Следовательно, нуклеотидные замены в гене СаМ, которые приводят к аминокислотным заменам, необходимо признать артефактами -ошибками Taq-полимерэзы в процессе амплификации кДНК лягушки. Сложнее объяснить происхождение 18 замен в нуклеотидной последовательности, которые не привели к аминокислотным заменам. Маловероятно, что все эти замены являются результатом ошибки Taq-полимерэзы. Следовательно, приходится признать, что в ооцитах лягушки Xenopus Laevis найден новый ген, кодирующий СаМ. Возможно, этот ген функционирует только на ранних стадиях развития лягушки и «молчит» во взрослом организме, поэтому он не привлек внимания исследователей.
Не совпадает с литературными данными также и выявленный нами факт, что индуцибельная изоформа NOS в бактериальных клетках имеет не цитозольную локализацию, т. е. она осаждается при ультрацентрифугировании вместе с мембранной фракцией. Как уже отмечалось, изменение температуры с 16 до 37 °C,
87 осаждение мембранной фракции в присутствии высокосолевых растворов ((NH4)2S04 до 20% вес/объем) не повлияли на мембранную локализацию фермента. Такое несоответствие можно объяснить следующими причинами: либо белок встраивается в мембрану, либо взаимодействует с каким-либо мембраносвязянным белком. И то, и другое событие могло произойти, например, в результате несанкционированной мутации, возникшей в процессе переклонирования кДНК? NOS в экспрессионный вектор. Хотя для? NOS описана мембранная локализация при взаимодействии его с кавеолином, маловероятно, чтобы фермент оставался связанным с белком, встроенным в мембрану, в высококонцентрированном солевом растворе. К тому же кавеолина нет в бактериальных клетках. Скорее всего, произошло именно «заякоривание» белка непосредственно в клеточную мембрану. Однако все это лишь рассуждения и предположения, у нас слишком мало экспериментальных данных, для того, чтобы сделать достоверные
выводы.
Результатом диссертационной работы, не входившим в ее цели и задачи, явилась разработка нового способа сушки белковых гелей. Даже на современном уровне развития научных технологий проблема недорогой и эффективной фиксации белковых гелей не потеряла своей актуальности. Новая методика, в отличие от описанных ранее, не требует специального оборудования или дорогостоящих реактивов. К тому же гель оказывается защищенным прозрачным пластиком, что исключает возможность его случайного повреждения. К недостаткам этого метода относятся не абсолютная воспроизводимость (около 90%) и длительность фиксации геля (до 24 часов). метгемоглобин, а также идентификацией молекулы N0 с помощью ЭПР.
Конструирование системы экспрессии индуцибельной изоформы синтазы оксида азота в клетках Escherichia coli (реферат, курсовая, диплом, контрольная)
1. Албертс Б., Брей Д., Льюис Дж., Рэфф М., Роберте К., Уотсон Д. Молекулярнаябиология клетки. М. Мир. 1994.
2. Башкатова В. Г., Раевский К. С. (1998) Оксид азота в механизмах повреждениямозга, обусловленных нейротоксическим действием глутамата II Биохимия. 1998. т.63. с.1020−1028.
3. БерезовТ.Т., Коровкин Б. Ф. Биологическая химия. М. Медицина. 1982.
4. Ванин А. Ф. (1998) Оксид азота в биологии: история, состояние и перспективыисследований. // Биохимия., т.63. с.867−869.
5. Горрен А.К.Ф., Майер Б. (1998) Универсальная и комплексная энзимология синтазы оксида азота. II Биохимия, т.63. с.870−880.
6. Досон Р., Эллиот Д., Эллиот У., Джонс К. Справочник биохимика. М. Мир. 1991.стр.477.
7. МаниатисТ., Фрич И. Ф., СэмбрукДж. Молекулярное клонирование. М. Мир. 1984.
8. Метелица Д. И. Активация кислорода ферментными системами. М. Наука. 1982.
9. Недоспасов А. А. (1998) Биогенный N0 в конкурентных отношениях II Биохимия.т.63. с.881−904.
10. Стокле Ж.-К., Мюлле Б., Андрианцитохайна Р., Клеицев А. (1998) Гиперпродукция оксида азота в патофизиологии кровеносных сосудов II Биохимия т.63. с.976−983.
11. Abu-Soud НМ, Wu С, Ghosh DK, and Stuehr DJ. (1998) Stopped-flow analysis of CO and NO binding to inducible nitric oxide synthase // Biochemistry. V.37 — P.3777−3786.
12. Abu-Soud HM, Yoho LL, and Stuehr DJ. (1994) Calmodulin controls neuronal nitric-oxide synthase by a dual mechanism. Activation of intraand interdomain electron transfer //J. Biol. Chem.-V.269 P.32 047;32050.
13. Adachi H, lida S, Oguchi S et al. (1993) Molecular cloning of a cDNA encoding an inducible calmodulin-dependent nitric-oxide synthase from rat liver and its expression in COS 1 cells //Eur. J. Biochem. V.217 — P.37−43.
14. Alderton WK, Boyhan A, and Lowe PN. (1998) Nitroarginine and tetrahydrobiopterin binding to the haem domain of neuronal nitric oxide synthase using a scintillation proximity assay //Biochem. J. V.332 — P.195−201.
15. AnagIi J, Hofmann F, Quadroni M, Vorherr T, and Carafoli E. (1995) The calmodulin-binding domain of the inducible (macrophage) nitric oxide synthase //Eur. J. Biochem. -V.233- P.701−708.
16. Babiychuk EB, Babiychuk VS, and Sobieszek A. (1995) Modulation of smooth muscle myosin light chain kinase activity by Ca2+/calmodulin-dependent, oligomeric-type modifications //Biochemistry. V.34 — P.6366−6372.
17. Barnes HJ, Arlotto MP, and Waterman MR. (1991) Expression and enzymatic activity of recombinant cytochrome P450 17 alpha-hydroxylase in Escherichia coli // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. V.88 — P.5597−5601.
18. Boutin JA. (1997) Myristoylation//Cell. Signal. -V.9 P.15−35.
19. Bredt DS, Hwang PM, Glatt CE, Lowenstein C, Reed RR, and Snyder SH. (1991) Cloned and expressed nitric oxide synthase structurally resembles cytochrome P-450 reductase//Nature. V.351 — P.714−718.
20. Brenman JE, Chao DS, Xia H, Aldape K, and Bredt DS. (1995) Nitric oxide synthase complexed with dystrophin and absent from skeletal muscle sarcolemma in Duchenne muscular dystrophy //Cell. V.82 — P.743−752.
21. Busconi L and Michel T. (1995) Recombinant endothelial nitric oxide synthase: post-translational modifications in a baculovirus expression system // Mo I. Pharmacol. V.47 — P.655−659.
22. Charles IG, Chubb A, Gill R et al. (1993) Cloning and expression of a rat neuronal nitric oxide synthase coding sequence in a baculovirus/insect cell system // Biochem. Biophys. Res. Commun. V.196 — P.1481−1489.
23. Cho HJ, Xie QW, Calaycay J et al. (1992) Calmodulin is a subunit of nitric oxide synthase from macrophages // J. Exp. Med. V.176 — P.599−604.91.
24. Corbin JD and Francis SH. (1999) Cyclic GMP phosphodiesterase-5: target of sildenafil //J. Biol. Chem.-V.274 P.13 729−13 732.
25. Crane BR, Arvai AS, Gachhui R et al. (1997) The structure of nitric oxide synthase oxygenase domain and inhibitor complexes see comments.//Science. V.278 — P.425−431.
26. Curran AD. (1996) The role of nitric oxide in the development of asthma // Int. Arch. Allergy. Immunol. V.111 — P.1−4.
27. Dawson TM, Dawson VL, and Snyder SH. (1992) A novel neuronal messenger molecule in brain: the free radical, nitric oxide see comments. // Ann. Neurol. V.32 -P.297−311.
28. Eissa NT, Strauss AJ, Haggerty CM, Choo EK, Chu SC, and Moss J. (1996) Alternative splicing of human inducible nitric-oxide synthase mRNA. tissue-specific regulation and induction by cytokines // J. Biol. Chem. V.271 — P.27 184−27 187.
29. Fossetta JD, Niu XD, Lunn CA, Zavodny PJ, Narula SK, and Lundell D. (1996) Expression of human inducible nitric oxide synthase in Escherichia coli // FEBS. Lett. -V.379- P.135−138.
30. Gachhui R, Abu-Soud HM, Ghosha DK et al. (1998) Neuronal nitric-oxide synthase interaction with calmodulin-troponin C chimeras//J. Biol. Chem. V.273 — P.5451−5454.
31. Gegner JA and Dahlquist FW. (1991) Signal transduction in bacteria: CheW forms a reversible complex with the protein kinase CheA //Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. V.88 — P.750−754.
32. Geller DA, Lowenstein CJ, Shapiro RA et al. (1993) Molecular cloning and expression of inducible nitric oxide synthase from human hepatocytes // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. V.90 — P.3491−3495.
33. Gerber NC and Ortiz de Montellano PR. (1995) Neuronal nitric oxide synthase. Expression in Escherichia coli, irreversible inhibition by phenyldiazene, and active site topology //J. Biol. Chem. V.270 — P.17 791−17 796.
34. Gerber NC, Rodriguez-Crespo I, Nishida CR, and Ortiz de Montellano PR. (1997) Active site topologies and cofactor-mediated conformational changes of nitric-oxide synthases //J. Biol. Chem. V.272 — P.6285−6290.
35. Ghosh DK, Abu-Soud HM, and Stuehr DJ. (1996) Domains of macrophage N (O) synthase have divergent roles in forming and stabilizing the active dimeric enzyme // Biochemistry. V.35 — P. 1444−1449.
36. Ghosh DK and Stuehr DJ. (1995) Macrophage NO synthase: characterization of isolated oxygenase and reductase domains reveals a head-to-head subunit interaction //Biochemistry. V.34 — P.801−807.
37. Gorren AC, List BM, Schrammel A et al. (1996) Tetrahydrobiopterin-free neuronal nitric oxide synthase: evidence for two identical highly anticooperative pteridine binding sites //Biochemistry. V.35 — P. 16 735−16 745.
38. Hevel JM and Marietta MA. (1994) Nitric-oxide synthase assays // Methods. Enzymol. -V.233 P.250−258.
39. Hevel JM, White KA, and Marietta MA. (1991) Purification of the inducible murine macrophage nitric oxide synthase. Identification as a flavoprotein // J. Biol. Chem. -V.266 P.22 789−22 791.
40. Kaufman S. (1993) New tetrahydrobiopterin-dependent systems // Annu. Rev. Nutr. -V.13- P.261−286.
41. Knowles RG. (1996) Nitric oxide synthases//Biochem. Soc. Trans. V.24 — P.875−878.
42. Knowles RG and Moncada S. (1994) Nitric oxide synthases in mammals//Biochem. J. -V.298 P.249−258.
43. Kobzik L, Reid MB, Bredt DS, and Stamler JS. (1994) Nitric oxide in skeletal muscle see comments.//Nature. V.372 — P.546−548.
44. Kubrina LN, Caldwell WS, Mordvintcev PI, Malenkova IV, and Vanin AF. (1992) EPR evidence for nitric oxide production from guanidino nitrogens of Larginine in animal tissues in wVo//Biochim. Biophys. Acta. V.1099 — P.233−237.
45. Lamas S, Marsden PA, Li GK, Tempst P, and Michel T. (1992) Endothelial nitric oxide synthase: molecular cloning and characterization of a distinct constitutive enzyme isoform// Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. V.89 — P.6348−6352.
46. Lamas S, Michel T, Collins T, Brenner BM, and Marsden PA. (1992) Effects of interferon-gamma on nitric oxide synthase activity and endothelin-1 production by vascular endothelial cells // J. Clin. Invest. V.90 — P.879−887.
47. Lee CM, Robinson LJ, and Michel T. (1995) Oligomerization of endothelial nitric oxide synthase. Evidence for a dominant negative effect of truncation mutants // J. Biol. Chem. V.270 — P.27 403−27 406.
48. Lee SJ and Stull JT. (1998) Calmodulin-dependent regulation of inducible and neuronal nitric-oxide synthase In Process Citation.// J. Biol. Chem. V.273 — P.27 430−27 437.
49. Lee SJ and Stull JT. (1998) Calmodulin-dependent regulation of inducible and neuronal nitric-oxide synthase //J. Biol. Chem. V.273 — P.27 430−27 437.
50. Lipton SA and Stamler JS. (1994) Actions of redox-related congeners of nitric oxide at the NMDA receptor//Neuropharmacology. V.33 — P. 1229−1233.
51. Liu JD and Parkinson JS. (1989) Role of CheWprotein in coupling membrane receptors to the intracellular signaling system of bacterial chemotaxis //Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. V.86 — P.8703−8707.
52. Lizasoain I, Mora MA, Knowles RG, Darley-Usmar V, and Moncada S. (1996) Nitric oxide and peroxynitrite exert distinct effects on mitochondrial respiration which are differentially blocked by glutathione or glucose// Biochem. J. V.314 — P.877−880.
53. Lowenstein CJ, Glatt CS, Bredt DS, and Snyder SH. (1992) Cloned and expressed macrophage nitric oxide synthase contrasts with the brain enzyme // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. V.89 — P.6711−6715.
54. Ludwig ML and Marietta MA. (1999) A new decoration for nitric oxide synthase a Zn (Cys)4 site In Process Citation.//Structure. — V.7 — P. R73−9.
55. Lyons CR, Orioff GJ, and Cunningham JM. (1992) Molecular cloning and functional expression of an inducible nitric oxide synthase from a murine macrophage cell line //J. Biol. Chem. V.267 — P.6370−6374.
56. Marietta MA. (1989) Nitric oxide: biosynthesis and biological significance //Trends. Biochem. Sci. V.14 — P.488−492.
57. Martasek P, Miller RT, Liu Q et al. (1998) The C331A mutant of neuronal nitric-oxide synthase is defective in arginine binding //J. Biol. Chem. V.273 — P. 34 799−34 805.
58. Miller RT, Mart#sek P, Raman CS, and Masters BS. (1999) Zinc Content of Escherichia coli-expressed Constitutive Isoforms of Nitric-oxide Synthase. Enzymatic activity and effect of pterin //J. Biol. Chem.-V.274 P.14 537−14 540.
59. Milligan G, Parenti M, and Magee Al. (1995) The dynamic role of palmitoylation in signal transduction //Trends. Biochem. Sci. V.20 — P.181−187.
60. Murphy ME and Noack E. (1994) Nitric oxide assay using hemoglobin method // Methods. Enzymol. V.233 — P.240−250.
61. Newton DC, Montgomery HJ, and Guy Guillemette J. (1998) The reductase domain of the human inducible nitric oxide synthase is fully active in the absence of bound calmodulin In Process Citation.//Arch. Biochem. Biophys. V.359 — P.249−257.
62. Ortiz de Montellano PR, Nishida C, Rodriguez-Crespo I, and Gerber N. (1998) Nitric oxide synthase structure and electron transfer//Drug. Metab. Dispos. V.26 — P. 11 851 189.
63. Perry JM and Marietta MA. (1998) Effects of transition metals on nitric oxide synthase catalysis//Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. V.95 — P.11 101−11 106.
64. Persechini A, Stemmer PM, and Ohashi I. (1996) Localization of unique functional determinants in the calmodulin lobes to individual EF hands // J. Biol. Chem. V.271 -P.32 217−32 225.
65. Persechini A, White HD, and Gansz KJ. (1996) Different mechanisms for Ca2+ dissociation from complexes of calmodulin with nitric oxide synthase or myosin light chain kinase //J. Biol. Chem. V.271 — P.62−67.
66. Pozo D, Reiter RJ, Calvo JR, and Guerrero JM. (1997) Inhibition of cerebellar nitric oxide synthase and cyclic GMP production by melatonin via complex formation with calmodulin //J. Cell. Biochem. V.65 — P.430−442.
67. Presta A, Siddhanta U, Wu C et al. (1998) Comparative functioning of dihydroand tetrahydropterins in supporting electron transfer, catalysis, and subunit dimerization in inducible nitric oxide synthase //Biochemistry. V.37 — P.298−310.
68. Raman CS, Li H, Martasek P, Krai V, Masters BS, and Poulos TL. (1998) Crystal structure of constitutive endothelial nitric oxide synthase: a paradigm for pterin function involving a novel metal center //Cell. V.95 — P.939−950.
69. Renodon A, Boucher JL, Sari MA, Delaforge M, Ouazzani J, and Mansuy D. (1997) Strong inhibition of neuronal nitric oxide synthase by the calmodulin antagonist and anti-estrogen drug tamoxifen // Biochem. Pharmacol. V.54 — P. 1109−1114.
70. Richards MK, Clague MJ, and Marietta MA. (1996) Characterization ofC415 mutants of neuronal nitric oxide synthase//Biochemistry. V.35 — P.7772−7780.
71. Rodriguez-Crespo I and Ortiz de Montellano PR. (1996) Human endothelial nitric oxide synthase: expression in Escherichia coli, coexpression with calmodulin, and characterization //Arch. Biochem. Biophys. V.336 — P.151−156.
72. Roman LJ, Sheta EA, Martasek P, Gross SS, Liu Q, and Masters BS. (1995) High-level expression of functional rat neuronal nitric oxide synthase in Escherichia coli // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. V.92 — P.8428−8432.
73. Salerno JC, Harris DE, Irizarry K et al. (1997) An autoinhibitory control element defines calcium-regulated isoforms of nitric oxide synthase// J. Biol. Chem. V.272 — P.29 769−29 777.
74. Sari MA, Booker S, Jaouen M et al. (1996) Expression in yeast and purification of functional macrophage nitric oxide synthase. Evidence for cysteine-194 as iron proximalligand//Biochemistry. V.35 — P.7204−7213.
75. Sato H, Nomura S, Sagami I, Ito O, Daff S, and Shimizu T. (1998) CO binding studies of nitric oxide synthase: effects of the substrate, inhibitors and tetrahydrobiopterin // FEBS. Lett. V.430 — P.377−380.
76. Sennequier N and Stuehr DJ. (1996) Analysis of substrate-induced electronic, catalytic, and structural changes in inducible NO synthase Biochemistry. V.35 — P.5883−5892.
77. Sessa WC. (1994) The nitric oxide synthase family of proteins //J. Vase. Res. V.31 -P.131−143.
78. Sessa WC, Harrison JK, Barber CM et al. (1992) Molecular cloning and expression of a cDNA encoding endothelial cell nitric oxide synthase // J. Biol. Chem. V.267 -P.15 274−15 276.
79. Sheta EA, McMillan K, and Masters BS. (1994) Evidence for a bidomain structure of constitutive cerebellar nitric oxide synthase// J. Biol. Chem. V.269 — P.15 147−15 153.
80. Snyder SH and Bredt DS. (1992) Biological roles of nitric oxide //Sci. Am. V.266 -P.68−71, 74−7.
81. Stuehr DJ. (1997) Structure-function aspects in the nitric oxide synthases //Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. V.37 — P.339−359.
82. Stuehr DJ and Ikeda-Saito M. (1992) Spectral characterization of brain and macrophage nitric oxide synthases. Cytochrome P-450-like hemeproteins that contain a flavin semiquinone radical //J. Biol. Chem. V.267 — P.20 547−20 550.
83. Tiritilli A. (1998) Nitric oxide (NO), vascular protection factor. Biology, physiological role and biochemistry of NO. //Presse. Med. V.27 — P. 1061−1064.
84. Uvarov VY and Lyashenko AA. (1995) The identification of the pterin-binding domain in the nitric oxide synthase’s sequence // Biochem. Biophys. Res. Commun. V.206 -P.736−741.
85. Venema RC, Ju H, Zou R, Ryan JW, and Venema VJ. (1997) Subunit interactions of endothelial nitric-oxide synthase. Comparisons to the neuronal and inducible nitric-oxide synthase isoforms//J. Biol. Chem. V.272 — P.1276−1282.
86. Vorherr T, Knopfel L, Hofmann F, Mollner S, Pfeuffer T, and Carafoli E. (1993) The calmodulin binding domain of nitric oxide synthase and adenylyl cyclase // Biochemistry. V.32 — P.6081−6088.
87. Wang J, Stuehr DJ, Ikeda-Saito M, and Rousseau DL. (1993) Heme coordination and structure of the catalytic site in nitric oxide synthase //J. Biol. Chem. V.268 — P.22 255−22 258.
88. Wang W, Inoue N, Nakayama T, Ishii M, and Kato T. (1995) An assay method for nitric oxide synthase in crude samples by determining product NADP //Anal. Biochem.- V.227 P.274−280.
89. Wang Y and Marsden PA. (1995) Nitric oxide synthases: gene structure and regulation //Adv. Pharmacol. V.34 — P.71−90.
90. White KA and Marietta MA. (1992) Nitric oxide synthase is a cytochrome P-450 type hemoprotein//Biochemistry. V.31 — P.6627−6631.
91. Wolf G. (1997) Nitric oxide and nitric oxide synthase: biology, pathology, localization // Histol. Histopathol. V.12 — P.251−261.
92. Wolff DJ, Datto GA, Samatovicz RA, and Tempsick RA. (1993) Calmodulin-dependent nitric-oxide synthase. Mechanism of inhibition by imidazole and phenylimidazoles //J. Biol. Chem. V.268 — P.9425−9429.
93. Wu C, Zhang J, Abu-Soud H, Ghosh DK, and Stuehr DJ. (1996) High-level expression of mouse inducible nitric oxide synthase in Escherichia coii requires coexpression with calmodulin //Biochem. Biophys. Res. Commun. V.222 — P.439−444.
94. Xie QW, Cho H, Kashiwabara Y et al. (1994) Carboxyl terminus of inducible nitric oxide synthase. Contribution to NADPH binding and enzymatic activity //J. Biol. Chem.- V.269 P.28 500−28 505.
95. Xie QW, Cho HJ, Calaycay J et al. (1992) Cloning and characterization of inducible nitric oxide synthase from mouse macrophages //Science. V.256 — P.225−228.
96. Xie QW, Leung M, Fuortes M, Sassa S, and Nathan C. (1996) Complementation analysis of mutants of nitric oxide synthase reveals that the active site requires two hemes//Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. V.93 — P.4891−4896.
97. Zhang M and Vogel HJ. (1994) Characterization of the calmodulin-binding domain of rat cerebellar nitric oxide synthase// J. Biol. Chem. V.269 — P.981−985.