Возрастные особенности иммунитета и гемостаза при гипофизарной недостаточности

Актуальность проблемы. Известно, что центральными органами иммунитета у млекопитающих и человека являются вилочковая железа и красный костный мозг [Петров Р.В. и др., 1986, 2000; Хаитов P.M. и др., 1995, 2001; Ярилин А. А., 1999, 2001; Черешнев В. А и др., 2002]. У птиц же органом, обеспечивающим созревание и дифференцировку В-лимфоцитов, а также приобретение ими иммуноглобулиновых рецепторов, служит сумка Фабрициуса [Степанов А.В., 1995; Степанов А. В. и др., 2003; Moriya С., 1987; Glick В., 1995].

Вместе с тем, установлено, что на состояние центральных органов клеточного и гуморального иммунитета оказывает влияние гипофиз. В частности, гипофизэктомия у различных животных приводит к инволютивным изменениям в тимусе [Корнева Е.А.и др., 1988, 1999; Патеюк А. В. и др., 2002, 2003, 2004; Кузник Б. И. и др. 2002, 2003, 2004; Nagy Т., Berszi I., 1978; Kalden J.R. et al., 1980; Cross R.J. et al., 1982; Manelli H. et al., 1989]. У гипофизэкто-мированных крыс число клеток и митотический индекс в вилочковой железе значительно уменьшаются, а количество лимфоидных клеток снижается более чем в два раза [Kalden J.R. et al., 1980; Cross RJ. et al., 1982]. Одновременно в тимусе резко снижается концентрация тимозина, оказывающего влияние на созревание и приобретение специфических рецепторов Т-лимфоцитами [Douek D.C., Koup R.A., 2000], а также наблюдается угнетение гуморального иммунитета [Девойно JI.B., Ерёмина О. Ф., 1977, 1993; Патеюк А. В. и др., 2003; Nagy Т., Berszi I., 1978; Cross R.J. et al., 1982].

Следует заметить, что в большинстве случаев исследования по изучению роли гипофиза в регуляции клеточного и гуморального иммунитета проводились на взрослых животных [Девойно JI.B., Еремина О. Ф., 1977; Cross R.J. et al., 1982; Fibris N., 1988, 1989; Manelli H., 1989]. Более того, до сих пор практически отсутствуют наблюдения, в которых изучалась бы взаимосвязь гипофиза и центрального органа гуморального иммунитета у птиц — сумки Фабрициуса в возрастном аспекте. Исключением служат лишь выполненные в последние годы работы А. В. Патеюка (2004), А. В. Патеюка и др. (2003), Б. И. Кузника и др. (2004), в которых показано, что у старых кур влияние гипофиза на центральные органы иммунитета значительно ослабевает. Из полученных данных сделан чрезвычайно важный вывод, что гипофиз в перинатальном периоде определяет дальнейшую функцию центральных органов иммунитета. Впоследствии тимус и бурса (а у человека и высших животных, по всей видимости, и костный мозг) могут осуществлять свою деятельность самостоятельно, не нуждаясь в воздействиях гипофиза.

Вместе с тем, с нашей точки зрения, в цитируемых работах имеются существенные недостатки. Дело в том, что А. В. Патеюк и др. (2003) и Б.И. Куз-ник и др. (2004) осуществляли гипофизэктомию либо в первый день жизни цыплят, либо у старых кур. До сих пор остаётся неясным, как будет протекать деятельность вилочковой железы и сумки Фабрициуса у птиц между указанными сроками.

Известно, что иммунитет тесно связан с системой гемостаза и неспецифической резистентностью, и все они вместе составляют единую гуморальную защитную систему организма [Кузник Б.И. и др., 1982; Кузник Б. И. и др., 1984;2004; Витковский Ю. А. и др., 1998, 1999]. Более того, существует иммунный механизм регуляции системы гемостаза, осуществляемый, с одной стороны, за счет образования аутоантител к активированным факторам свёртывания крови и фибринолиза [Цыбиков Н.Н., 1984; Кузник Б. И. и др., 19 892 004], а с другой — за счёт продукции провоспалительных и противовоспалительных цитокинов [Кузник Б.И. и др., 1998;2002; Витковский Ю. А. и др., 1997;1999]. Однако играет ли гипофиз существенную роль в регуляции взаимосвязи между иммунитетом и гемостазом, до последнего времени остается неясным.

Всё вышеизложенное свидетельствует о том, что избранная тема работы является актуальной и имеет важное теоретическое и практическое значение.

Цель и задачи исследования

Целью настоящего исследования явилось изучение роли гипофиза в регуляции клеточного и гуморального иммунитета, свёртывания крови и фибринолиза при старении.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

1. Изучить особенности клеточного и гуморального иммунитета у кур различного возраста.

2. Изучить возрастные особенности свёртывания крови и фибринолиза у кур.

3. Установить, как влияет гипофизэктомия, произведенная у цыплят на 1, 5, 20, 45 дни жизни, годовалых и старых кур, на состояние клеточного и гуморального иммунитета.

4. Изучить влияние гипофизэктомии, произведенной у кур в разном возрасте, на свёртываемость крови и фибринолиз.

Научная новизна. Установлено, что у цыплят и кур по мере старения наступает депрессия клеточного и гуморального иммунитета, что выражается в инволюции тимуса и бурсы, уменьшении числа лейкоцитов, лимфоцитов, антителообразующих клеток, антителозависимой клеточной цитотоксично-сти, титра агглютининов и гемолизинов.

У кур в отличие от млекопитающих независимо от возраста и содержания контактных факторов свёртывания отсутствует так называемый хагеман-зависимый (ХПа-зависимый) фибринолиз.

По мере старения у кур развивается гиперкоагуляция и тормозится фиб-ринолитическая активность крови.

Установлено, что неонатальная гипофизэктомия, проведенная в первые часы жизни цыплят, приводит * резкому снижению массы тела, тимуса и срлезёнки, но способствует значительному увеличению веса бурсы. Одновременно при этом уменьшается количество лейкоцитов, снижаются число анти-телообразующих клеток (АОК) и индекс антителозависимой клеточной цито-токсичности (АЗКЦ), резко уменьшается концентрация гемагглютининов и гемолизинов, возникает гиперкоагуляция и депрессия фибринолиза. При удалении гипофиза на 5 день жизни цыплят, изменения со стороны иммунитета и гемостаза выражены в значительно меньшей степени, чем у птиц с неона-тальной гипофизэктомией. Показано, что чем старше птицы, тем менее интенсивно удаление гипофиза влияет на состояние иммунитета и гемостаза. У старых (5−6 лет) кур эти изменения практически отсутствуют.

Теоретическая и практическая ценность. На основании полученных данных предложена гипотеза, объясняющая роль гипофиза в регуляции клеточного и гуморального иммунитета, свёртывания крови и фибринолиза. Приведены убедительные данные, доказывающие, что в первые часы, а, возможно, дни жизни цыплят гипофиз запускает функции центральных органов клеточного и гуморального иммунитета — вилочковой железы и сумки Фабрициуса. В дальнейшем функционирование этих органов, хотя и с меньшей интенсивностью процессов, может происходить и без участия гипофиза.

В основе возникающих после гипофизэктомии гиперкоагуляции и депрессии фибринолиза лежат нарушения иммунного механизма регуляции системы гемостаза.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. По мере старения у птиц снижается масса тимуса и бурсы, уменьшается индекс антителозависимой клеточной цитотоксичности, титр гемагглютининов и гемолизинов, развивается гиперкоагуляция и тормозится ф ибрино-лиз. У кур различного возраста отсутствует хагеманзависимый фибринолиз.

2. Гипофизэктомия у цыплят, проведенная в первые дни жизни, сопровождается нарушениями клеточного и гуморального иммунитета, развитием гиперкоагуляции и депрессией фибринолиза. Такие цыплята отстают в росте, у них отмечается уменьшение массы тела, тимуса и селезенки, в то время как масса бурсы резко возрастает. Антителозависимая клеточная цитотоксич-ность, титр гемагглютининов и гемолизинов у них практически не определяется. Такие цыплята нежизнеспособны и погибают после 45 дня жизни.

3. Гипофизэктомия, произведенная на пятые сутки после появления цыплят на свет, сопровождается менее выраженными изменениями со стороны клеточного и гуморального иммунитета, свёртывания крови, фибринолиза, по сравнения со сдвигами, обнаруженными после удаления гипофиза у птиц в первые часы жизни.

4. Гипофизэктомия, осуществлённая через три недели и полтора месяца после появления цыплят на свет, приводит к относительно незначительным сдвигам со стороны клеточного и гуморального иммунитета, свёртывания крови и фибринолиза. При удалении гипофиза у зрелых и старых кур изменения со стороны иммунитета и гемостаза практически отсутствуют.

5. Гипофиз в первые часы и дни жизни цыплят запускает деятельность тимуса и бурсы, после чего их функции, как центральных органов клеточного и гуморального иммунитета, хотя и с меньшей интенсивностью процессов, могут осуществляться и без его участия.

Апробация работы и реализация результатов исследований. Материалы исследований докладывались и обсуждались на заседаниях кафедр нормальной и патологической физиологии, на проблемных комиссиях «Физиология и патология иммунитета и гемостаза» и «Геронтология и гериатрия» Читинской государственной медицинской академии, на заседаниях Читинского физиологического и геронтологического обществ, а также Ученого совета Санкт-Петербургского института биорегуляции и геронтологии, на симпозиуме «Физиология иммунной системы» XIX Всероссийского съезда физиологов им. академика И. П. Павлова (Екатеринбург, сентябрь, 2004), научной конференции, посвященной пятидесятилетию кафедры нормальной физиологии Читинской медицинской академии (октябрь 2004), Европейском конгрессе по иммунологии и аллергологии (Москва, февраль 2005).

Результаты работы внедрены в учебный процесс на кафедрах нормальной и патологической физиологии Читинской государственной медицинской академии, кафедре медико-биологических основ физической культуры Забайкальского государственного педагогического университета и вошли в книгу Б. И. Кузника «Физиология и патология системы крови», одобренную Министерствами высшего образования и здравоохранения Российской Федерации в качестве дополнительной литературы для изучения нормальной и патологической физиологии. Кроме того, материалы диссертационной работы вошли в учебник «Физиология человека» (редакторы В. М. Покровский и Г. Ф. Приходько), одобренный Министерством здравоохранения РФ для преподавания в высших учебных медицинских заведениях.

ВЫВОДЫ.

1. Масса тимуса у цыплят к пятым суткам после рождения увеличивается в 2,5 раза, а к шестьдесят пятому дню — в 8 раз, достигая максимума в возрасте одного года, и в дальнейшем значительно снижается. Вместе с тем, отношение массы тимуса к массе тела достигает максимальных величин к 5−10 дню жизни цыплёнка, а затем постепенно уменьшается к старости.

2. Наибольшая масса бурсы отмечается у трёхмесячных цыплят, к годовалому возрасту она уменьшается в 6, а к старости — в 9 раз. Максимальное отношение массы бурсы к массе тела выявляется в первый день жизни цыплят, к 5−10 дню оно снижается и сохраняется на постоянных цифрах до трёхмесячного возраста птиц. В дальнейшем отношение массы бурсы к массе тела у кур резко падает, становясь минимальным к старости.

3. Масса селезёнки у птиц прогрессивно увеличивается, достигая, как и масса тела, максимума к 1 году, а затем к старости снижается. Отношение массы селезёнки к массе тела становится максимальным к 45 дню жизни и по мере старения уменьшается. При этом число клеток в селезёнке по мере старения кур возрастает, увеличиваясь максимально к 1 году и несколько с? шжаясь в старости. Число АОК в селезенке до 90 дня жизни цыплят постепенно увеличивается, а к 1 году и особенно к старости заметно снижается.

4. Индекс АЗКЦ у цыплят достигает максимума к 21 дню жизни и до одного года остаётся стабильным, снижаясь к старости. Содержание лейкоцитов, гемагглютининов и гемолизинов у кур становится максимальным к 45 дню жизни и сохраняется на стабильных цифрах до одного года, к старости несколько уменьшаясь.

5. У кур к старости развивается гиперкоагуляция, о чем свидетельствует сокращение времени свёртывания крови и рекальцификации плазмы, каолинового времени и АЧТВ, протромбинового и тромбинового времени.

Одновременно у птиц наступает депрессия фибринолиза, благодаря чему возрастают коэффициенты тромбоопасности. Под воздействием каолина у кур различного возраста не наблюдается активация фибринолиза.

6. Гипофизэктомия, произведенная в первые часы жизни цыплят, приводит к резкому уменьшению массы тела, тимуса, сумки Фабрициуса и селезёнки. При этом одновременно происходит сокращение числа лейкоцитов, уменьшение содержания клеток, в том числе АОК, в селезенке, угнетением АЗКЦ, снижение уровня гемагглютининов и гемолизинов, развивается выраженная гиперкоагуляция и депрессия фибринолиза. Указанные сдвиги постепенно нарастают и достигают максимума к 45 дню после операции. Масса бурсы в первые 20 дней после гипофизэктомии снижается, а к 45 дню возрастает в 5−9 раз.

7. Гипофизэктомия, произведенная на 5 день жизни цыплят, приводит к менее существенным сдвигам в изучаемых показателях иммунитета и гемостаза, чем у птиц с удалённым в первый день жизни гипофизом. Обнаруженные изменения достигают максимума уже к 5 дню после оперативного вмешательства и сохраняются на одном и том же уровне на протяжении всего срока исследования (45 дней).

8. Степень изменения показателей клеточного и гуморального иммунитета, свёртывания крови и фибринолиза зависит от возраста кур, в котором произведена гипофизэктомия. При проведении гипофизэктомии у старых кур эти сдвиги практически отсутствуют.

9. Гипофиз у птиц осуществляет свои влияния на клеточный и^{моральный} иммунитет через его центральные органы — тимус и бурсу. Сдвиги в состоянии свёртывающей системы крови и фибринолиза у гипофизэктомированных птиц носят преимущественно вторичный характер и обусловлены нарушением иммунологической регуляции системы гемостаза.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

.

По современным представлениям, в организме человека и животных имеются 3 основные системы регуляции физиологических процессовнервная, эндокринная и иммунная. Иммунологическая или клеточно-гуморальная регуляция предполагает участие в этом процессе практически всех элементов, заинтересованных в иммунном ответе: лимфоцитов, макрофагов, моноцитов, нейтрофилов, эозинофилов, базофилов, эндотелио-цитов и других [Петров Р.В., 1982; Кузник Б. И. и др., 1989, 1998, 2002, 2004; Хаитов P.M., 2001; Черешнев В. А. и др., 2002]. Эти клетки способны выделять самые разнообразные биологически активные соединения, изменяющие течение физиологических реакций. Такими веществами являются гормоны, простагландины, лейкотриены [Кузник Б.И. и др., 1989], цито-кины [Кузник Б.И. и др., 1989; Пальцев М. А., Иванов А. А., 1995; Витковский Ю. А., 1997; Витковский Ю. А. и др., 1997;1999], иммуноглобулины [Чипенс Г. И, 1979, 1984; Чипенс Г. И., Склярова С. Н., 1988]. Кроме того, в различных органах и тканях синтезируются полипептиды, оказывающие непосредственное влияние на иммунную систему. Следовательно, организм располагает совокупностью регуляторных пептидов, обеспечивающих согласованную деятельность клеточных популяций [Ашмарин И.П., 1986; Ашмарин И. П., Обухова М. Ф., 1986; Кузник Б. И. и др., 1989, 2004; Абрамов В. В., 1991; Акмаев И. Г., Гриневич В. В, 2001; Khavinson V.Kh., 2002].

Гипофиз, принимая участие в иммунологических реакциях [Девойно Л.В., 1977; Девойно Л. В., Ильюченок Р. Ю., 1993; Патеюк А. В., 1989;2004; Патеюк А. В. и др., 2003; Nagy Т., Berszi I., 1978; Manelli Н. et al., 1989; Proudman J.A. et al., 1999], должен реализовать своё влияние через центральные и периферические органы иммунитета — вилочковую железу, костный мозг, сумку Фабрициуса, селезенку, лимфатические узлы, а также лимфоэпителиальные образования желудочно-кишечного тракта, мочеполовой системы и др. Для подтверждения этой гипотезы нами и были предприняты эксперименты, анализ которых является предметом данного обсуждения.

Прежде всего, мы считали необходимым изучить, как изменяется состояние клеточного и гуморального иммунитета у кур различного возраста.

Наши наблюдения показали, что система иммунитета у цыплят созревает к 20−65 дню и в дальнейшем отличается относительным постоянством. У кур в возрасте 5−6 лет отмечалось незначительное уменьшение числа лимфоцитов и моноцитов за счёт повышения количества псевдоэозинофилов, а также снижение АЗКЦ, числа АОК, титра агглютининов и гемолизинов. Аналогичное угнетение клеточного и гуморального иммунитета выявляется и у людей в пожилом и старческом возрасте [Петров Р. В, 1982; Хаитов P.M. и др, 1995; Ярилин А. А, 1999; Фрейдлин И. С, 2001; Галактионов В. Г, 2004].

Своеобразные изменения у кур претерпевает и система гемостаза. Однако у цыплят, проживших в условиях лаборатории при искусственном освещении 1 сутки, 5, 10 и 20 дней, показатели свёртывания крови и фибринолиза были приблизительно такими же, как и в первый день исследования. Исключение составляли лишь несколько сокращенное время свёртывания крови, рекальцификации плазмы и АЧТВ у 20-дневных цыплят по сравнению с птицами первых пяти дней жизни (Р<0,05). По всей видимости, эти сдвиги, связаны с появлением у птиц контактных факторов свёртывания крови.

У цыплят, проживших полтора месяца, по сравнению с птицами первых 20 дней жизни, время свёртывания крови, рекальцификации плазмы, ке элиновое, протромбиновое и тромбиновое гремя оказались удлинёнными, а фибринолиз проявлял тенденцию к усилению. Нам трудно объяснить этот пик относительной гипокоагуляции. Не исключено, что в этом возрасте в организме цыплят происходят существенные гормональные перестройки.

У годовалых кур, по сравнению с цыплятами первых 20 дней жизни, каких-либо существенных отклонений в изучаемых показателях свёртывания крови нами не обнаружено. Исключение составляет лишь тенденция к сокращению времени рекальцификации. Следует, однако, заметить, что время рекальцификации является не стандартизированным тестом, а потому не может служить в отрыве от других показателей, характеризующих общую коагуляционную активность крови (АЧТВ, каолиновое время), надежным тестом, свидетельствующим о развитии гиперили гипокоагуляции. Вместе с тем, время свёртывания крови, АЧТВ и каолиновое время у цыплят первых 20 дней жизни и у годовалых кур оказалось приблизительно одинаковым.

Между тем, у годовалых кур по сравнению с 45-дневными цыплятами выявлялась гиперкоагуляция, о чем свидетельствует сокращение времени свёртывания крови, рекальцификации плазмы, каолинового время и АЧТВ (Р<0,05).

Наиболее выраженные сдвиги в системе свёртывания крови наблюдались у 5−6-летних кур. У них сокращалось время свёртывания крови и рекальцификации плазмы, каолиновое время и АЧТВ (Р<0,05), не только по отношению к 45-дневным цыплятам, но и годовалым курам. Кроме того, у кур в возрасте 5 лет повышалось содержание фибриногена.

Следовательно, явная гиперкоагуляция и депрессия фибринолиза, по отношению ко всем возрастным группам, выявляются лишь у старых кур. Более того, у старых кур, в конечном итоге, увеличиваются коэффициенты тромбоопасности. Аналогичные изменения обнаружены также у человека [Германов В.А. и др., 1971; Балуд* В. П. и др., 1978, 1995; Коркушко О. В., Коваленко А. И., 1988; Коркушко О. В., Лишневская В. Ю., 2003].

Следует обратить внимание на еще один факт, обнаруженный по ходу исследования — у кур, независимо от наличия или отсутствия контактных факторов (XI и XII), во всех возрастных группах не наступает усиление фибринолитической активности крови при активации каолином. Вполне возможно, что это объясняется чрезвычайно низким содержанием факторов XI и XII у птиц [Зубаиров Д.А., 2000; Кузник Б. И., Патеюк А. В., 2003; Патеюк А. В. и др., 2003].

Наблюдения, проведенные нами, позволили сделать вывод, что неона-тальная гипофизэктомия приводит к значительному отставанию развивающихся птиц в росте и весе, падению массы тимуса, тогда как вес бурсы через 45 дней после оперативного вмешательства резко увеличивается. При этом падает масса селезенки по отношению к массе тела, тогда как плотность клеток в ней увеличивается примерно в 10 раз, а количество стромальных элементов значительно снижается.

Выраженные сдвиги через 45 дней после неонатальной гипофизэктомии у цыплят наблюдались в показателях иммунитета: резко уменьшалось число лейкоцитов, главным образом, за счёт снижения числа лимфоцитов, почти в 50 раз падала неспецифическая антителозависимая цитотоксич-ность клеток (АЗКЦ), практически не выявлялись или определялись в крайне низкой концентрации гемагглютинины и гемолизины, а в селезенке резко (в 3−4 раза) уменьшалось число АОК. Наряду с нарушениями иммунитета, у птиц выявлялась гиперкоагуляция, сопровождаемая сокращением протромбинового и тромбинового времени, увеличением уровня фибриногена и торможением фибринолиза. Обнаруженные изменения столь существенны, что позволяют говорить о наличии у неонатально гипофизэкто-мированных цыплят хронической формы ДВС-синдрома. Эти сдвиги несовместимы с жизнью и без введения препаратов, компенсирующих деятельность гипофиза, все ць-плята, перенёсшие гипофизэктомию, погиба’эт.

Следует заметить, что обнаруженные сдвиги после неонатальной гипофизэктомии со стороны клеточного и гуморального иммунитета в большинстве случаев развиваются постепенно, достигая максимальных значений к 45 дню жизни цыплят. Вместе с тем, со стороны системы гемостаза они носят несколько иной характер. На 5 день после гипофизэктомии время свёртывания крови, рекальцификации плазмы, каолиновое, протромби-новое и тромбиновое время, АЧТВ сокращались значительно, концентрация фибриногена резко возрастает, а фибринолиз тормозился. К 10 и 20 суткам после операции эти сдвиги в той или иной степени нивелировались, а к 45 дню достигали максимальных значений. По всей видимости, изменения в системе гемостаза на пятый день после гипофизэктомии обусловлены в той или иной степени реакцией на операционную травму [Баркаган З.С., 1988; Балуда В. П. и др., 1995; Кузник Б. И. и др., 1988, 2001, 2004].

Если гипофиз удаляли у цыплят, проживших 5 дней, то у них также наблюдалась депрессия клеточного и гуморального иммунитета. Однако эти изменения не достигали столь выраженных сдвигов, как у цыплят, подвергшихся гипофизэктомии в первый день жизни. Более того, они сохранялись приблизительно на одном и том же уровне вплоть до конца исследования (45 день после гипофизэктомии). Одновременно у таких птиц развивалась гиперкоагуляция и слегка тормозился фибринолиз.

При удалении гипофиза у цыплят в 20 дневном возрасте изменения в изучаемых показателях иммунитета и гемостаза были выражены в меньшей степени, чем у птиц, гипофизэктомия которым производилась в первые часы или на 5 день жизни. Еще слабее эти сдвиги проявлялись у полуторамесячных цыплят и взрослых (годовалых) кур. У старых птиц (5−6 лет) они практически не выявлялись.

Следует заметить, что чем старше были птицы, тем меньше был среди них падёж после гипофизэктомии. У цыплят, прооперированных в первый день жизни, он достигал 30−40%, у пятидневных — 20%, у двадцатидневных — 10%, у полуторамесячных цыплят, зрелых и старых кур он отсутствовал.

На различия, возникающие при неонатальной гипофизэктомии и удалении гипофиза в более позднем возрасте, следует обратить особое внимание. Из полученных данных следует, что гипофиз, как и центральные органы иммунитета — тимус, костный мозг, а у птиц — бурса, играет существенную роль в регуляции иммунологических функций лишь в первые дни жизни животных. Гипофиз необходим для запуска деятельности центральных органов иммунитета — тимуса и бурсы (у птиц), а возможно, и костного мозга. Эта реакция проявляется на самых ранних этапах постна-тального онтогенеза. В дальнейшем тимус и бурса способны управлять клеточным и гуморальным иммунитетом и без «указаний» гипофиза, хотя их деятельность будет осуществляться на более низком уровне.

Высказанное мнение подтверждается морфологическими исследованиями, проведенными М. А. Джулай и др. (2004) с нашим участием.

Нами установлено, что масса тимуса у цыплят различного возраста, старых и зрелых кур после гипофизэктомии прогрессивно снижается, достигая минимальных величин к 45 дню после оперативного вмешательства. Вместе с тем, чем старше были птицы, тем меньше у них после удаления гипофиза уменьшалась масса тимуса.

Если гипофизэктомия была произведена в первые часы жизни цыплят, то к 45 дню после операции макроскопически отмечалась резкая атрофия органа. Дольки тимуса уменьшались в 10−15 раз по сравнению с вилочковой железой интактных птиц.

Следует обратить особое внимание на то, что у цыплят, прооперированных в первые часы жизни, масса бурсы вначале (на 5 сутки) уменьшалась, а затем начинала возрастать, увеличиваясь к 45 дню после оперативного вмешательства в различных сериях в Г-9 раз. Несколько иная реакция со стороны бурсы наблюдалась у цыплят с удалённым гипофизом на 5 день жизни. У них к 45 дню после гипофизэктомии масса увеличивалась всего в 2,5 раза. При гипофизэктомии у цыплят на 20 и 45 день жизни через полтора месяца после операции масса бурсы не только не повышалась, но и значительно снижалась. Вместе с тем, у зрелых и старых кур вес сумки Фабрициуса после удаления гипофиза изменялся не столь резко, как у 20 и 45 дневных цыплят. Следует, еще раз отметить, что уже к трёхмесячному возрасту у птиц наблюдаются выраженные инволютивные изменения сумки Фабрициуса, что приводит к значительному снижению её массы [Болотников И. А, Конопатов Ю. В, 1993; Степанов А. В. и др, 2003].

Следовательно, гипофизэктомия приводит к резкому накоплению в бурсе лимфоидной ткани, что, безусловно, связано с нарушением диффе-ренцировки и миграции лимфоцитов. Эти сдвиги сопровождаются нарушением выхода лимфоцитов из бурсы, благодаря чему значительно увеличивается её масса.

Из представленных сведений вытекает, что после неонатальной гипофизэктомии тимус и бурса утрачивают свои основные функции и перестают оказывать влияние на развитие и дифференцировку Ти В-лимфоцитов. Следовательно, гипофиз оказывает действие на состояние клеточного и гуморального иммунитета через центральные иммунные органы — тимус и бурсу (у птиц), а возможно, и костный мозг. При удалении гипофиза в первые часы жизни цыплят наступает инволюция этих органов, в результате чего проявляются нарушения клеточного и гуморального иммунитета, несовместимые с жизнью.

Но одновременно с нарушениями в клеточном и гуморальном иммунитете возникают существенные сдвиги в состоянии свёртывающей системы крови и фибринолиза. Безусловно, эти изменения в значительной степени связаны с выключением гормональной функции гипофиза. Многочисленными исследованиями установлено, что различные гормоны передней и задней долей гипофиза (АКТГ, вазопрессин и другие) способны ускорять свёртываемость крови и стимулировать фибринолиз [Георгиева С.А., Клячкин JI.M., 1979; Сергеев П. В. и др., 1974; Георгиева С. А., Пу-чиньян Д.М., 1982], тогда как тиреотропиый гормон, как и гормоны щитовидной железы, замедляют свёртываемость крови [КиричукВ. Ф., 1980].

Известно, что системы иммунитета и гемостаза теснейшим образом связаны между собой и образуют единую защитную системы организма [Кузник Б.И. и др., 1982; Кузник Б. И. и др., 1989; Цыбиков Н. Н., 1984; Кузник Б. И. и др., 2004]. Первичные и вторичные иммунодефициты неминуемо приводят к развитию гиперкоагуляции и торможению фибринолиза [Будажабон Г. Б., 1988; Кузник Б. И. и др., 1998, 2001, 2002, 2004], что и наблюдалось в наших экспериментах.

Еще со времён исследований Н. Selye (1953) было известно, что при стрессе, особенно в фазу истощения, наступают дегенеративные изменения в тимико-лимфатической системе. Наступающие при этом изменения в системе гемостаза Н. Selie (1966) обозначил как тромбогеморрагический феномен (Trombohemorrhagic Phenomena).

В настоящее время не вызывает сомнений, что стресс сопровождается не только выраженными сдвигами в системе иммунитета, но и гемостаза. Этой проблеме неоднократно посвящались симпозиумы и съезды. Влиянию стресса на иммунную систему посвящено необычайно большое число публикаций, в том числе монографий и обзорных стетей [Левандо В.А. и др., 1990; Першин Б. Б., 1994; Арушанян Э. Б., Бейер Э. В., 2004; CTLeary А., 1990; Stone А.А., Boubjerg D.H., 1994]. То же самое можно сказать и о свёртывающей системе крови [Георгиева С.А., Клячкин Л. М., 1979; Георгиева С. А., Пучиньян Д. М., 1982; Кузник Б. И., 2004; Мачабели М. С. и др., 1989; Selye Н&bdquo- 1966].

В обзоре литературы показано, что гормоны передней и задней доли гипофиза способны оказывать выраженное влияние на состоянче клеточного и гуморального иммунитета. Более того, И. А. Болотников и Ю. В. Конопатов (1993), обобщая данные литературы, указывают, что. «функциональная активность тимуса находится под гормональным контролем передней доли гипофиза (соматотропного гормона, в частности) и надпочечников. Они во многом определяют распределение тимических факторов в организме и уровни миграции Т-лимфоцитов в органы и ткани. На многих лимфоцитах имеются рецепторы к инсулину, гормону роста, тестостерону, адренокортикотропному гормону и глюкокортикоидам». По мнению авторов, аденогипофиз также выделяет тимусстимулирующий гормон, природа которого до последних дней остаётся неизученной.

Аналогичного взгляда придерживаются А. В. Патеюк (1989, 1997), А. В. Патеюк и др. (2003), Б. И. Кузник и др. (2003, 2004), показавшие, что передняя доля гипофиза непосредственное влияет на функцию тимуса и состояние клеточного иммунитета, а задняя (у птиц) — на бурсу и гуморальный иммунитет. Этим исследователям удалось выделить комплекс пептидов из передней и задней долей гипофиза. Оказалось, что пептиды передней доли гипофиза увеличивают плотность рецепторов на Ти Т-активных лимфоцитах, а задней — на В-лимфоцитах.

Изучая состояние иммунитета на неонатально гипофизэктомированных цыплятах и старых курах, А. В. Патеюк и др. (2003) пришли к выводу, что гипофиз оказывает влияние на состояние клеточного и гуморального иммунитета лишь в первые часы, а может быть дни жизни животного.

Однако в опытах, проводимых указанными авторами, имелся существенный дефект — не были проведены эксперименты на цыплятах, перенесших гипофизэктомию на различных этапах онтогенеза.

У старых кур удаление гипофиза не приводило к существенным сдвигам в состоянии клеточного и гуморального иммунитета, ибо у них наступила инволюция как тимуса, так и бурсы. И. А. Болотников и Ю.В. Конопа-тов (19″ *3) отмечают, что инволюция тимуса и бурсы у кур происходит до того периода, как гонады начинают активно увеличиваться в размерах, т. е. к трехмесячному возрасту. В. Glick еще в 1960 г. показал, что масса бурсы у породы кур «белый Леггорн» неуклонно снижается после трёх месяцев жизни, а отношение массы бурсы к массе тушки — после 78 дня.

Следовательно, для окончательного вывода о роли гипофиза в регуляции клеточного и гуморального иммунитета необходимо было провести опыты на промежуточных этапах онтогенеза птиц, и в частности, до инво-лютивных процессов, происходящих в тимусе и бурсе, что и было осуществлено нами.

В то же время, воздействия на иммунитет со стороны гипофиза более многообразны, чем это вытекает из наших исследований.

Как установлено А. В. Патеюком и др. (2003), гипофиз способен оказывать непосредственное влияние на созревание и дифференцировку Ти В-лимфоцитов, минуя тимус и бурсу. Это действие осуществляется через новый класс биологических регуляторов многоклеточных систем, получивших наименование цитомедины [Морозов В. Г, Хавинсон В. Х, 1983; Кузник Б. И. и др., 1989;2004; Хавинсон В. Х, Морозов В. Г., 2001; Хавинсон В. Х, Анисимов В. Н., 2003; Хавинсон В. Х. и др., 2003; Рыжак Г. А., Коновалов С. С., 2004; Khavinson V.Kh., 2002].

Полученные факты позволяют считать, что гипофиз является важным органом, принимающим участие в регуляции иммунитета. Его иммунологические функции заключаются в том, чтобы запустить процессы созревания Ти В-лимфоцитов в вилочковой железе, сумке Фабрициуса и костном мозге.

Суммируя результаты наших экспериментов, мы можем предположить, что существует 3 механизма действия гипофиза на иммунитет и гемостаз. Первый — гормональная и цитомединовая регуляция передней долей гипофиза функции тимуса, а задней — бурсы. Второй — влияние на иммунитет и гемостаз через гормоны надпочечников, половых желез и щитовидной железы. Третий — непосредственное воздействие на диффе-ренцировку и активность Ти В-лимфоцитов.

Вместе с тем, остаётся неясным, как осуществляется деятельность организма после удаления гипофиза. Известно, что гормоны гипофиза вырабатываются и за его пределами. Прежде всего, это относится к так называемой АПУД-системе, гормональные влияния которой весьма многочисленны и разнообразны и не ограничиваются процессами пищеварения и всасывания. Особенно важная функция в этих реакциях принадлежит двенадцатиперстной кишке, о которой «.можно говорить не только как о гипофизе брюшной полости, но и как о гипоталамо-гипофизарной системе брюшной полости» [Уголев A.M., 1978]. Доказано, что кишечная гормональная система влияет на деятельность щитовидной железы, коры надпочечника, инсулярного аппарата и гипоталамуса. В частности, удаление двенадцатиперстной кишки тормозит синтез и секрецию гормонов гипоталамуса. Не вызывает сомнений, что, в свою очередь, гипоталамус и гипофиз оказывают влияние на синтез гормонов в двенадцатиперстной кишке [Уголев A.M., 1977].

АПУД-система состоит из особых клеток, располагающихся практически повсеместно и обладающих способностью поглощать и декарбокси-лировать моноамины — 5-гидрокситриптофан и L-дигидроксифенилаланин, из которых при помощи ферментов синтезируются биогенные амины и пептидные гормоны. Установлено, что в тканях желудочно-кишечного тракта имеется скопление клеток, секретирующих более 30 различных гормонов. К ним относятся гастрин, гастринвысвобождающий пептид, секретин, холецистокинин, соматостатин, ГИП, ВИП, вещество Р, моти-лин, галанин, глюкагоноподобные пептиды 1 и 2, нейротензин, нейроме-дин N, петид YY, панкреатический полипептид, нейропептид Y, пептид гестидинметионин (РНМ) и, что особенно важно, гипофизарный, актиьирующий аденилатциклазу пептид, выявляемый в двух формах — РАСР 27 и РАС АР 38 [Климов П.К., 1987; Carr D.J., Blalock J.E., 1989].

Гормональная координация функций различных органов и систем организма достигается строго упорядоченной деятельностью нейроэндок-ринных клеток. Наличие последних в различных органах отражает существование в организме высокоорганизованной периферической АПУД-системы или диффузной эндокринной системы (ДНЭС), специфической функцией которой является выработка биогенных аминов и пептидных гормонов.

Создание концепции о ДНЭС существенно расширило представления о значении гормонов в регуляции функций организма. Расположенные практически во всех органах и продуцируя биологически активные вещества, клетки диффузной нейроэндокринной системы (апудоциты) играют роль местных регуляторов гомеостаза, действуя нейрокринным, эндокринным и паракринным путем.

Позднее было установлено, что нервная и иммунная систмы имеют тесные взаимоотношения через продукцию и секрецию множества клеточных медиаторов, включая цитокины, интегрины, хемокины и другие молекулы. Так, например, было показано, что цитокины могут продуцироваться лимфоцитами и нейроглиальными клетками.

Такая общность химических механизмов трех регуляторных систем организма — нервной, эндокринной и иммунной стимулировала бурное развитие исследований в новой области знаний, названной пейроиммуно-эндокринологией. В последнее время особое значение приобретает факт, который следует рассматривать ключевым — нервные и иммунные клетки, вместе с клетками ДНЭС (апудоцитами) присутствуют в большинстве висцеральных органов, где они способны вырабатывать регуляторные пептиды и биогенньп амины, идентичные пептидам, синтезируемым в центральной нервной системе, иммунной и эндокринной системах [Кветной И.М. и др, 2001; Полякова В. О, Кветной И. М, 2004].

Таким образом, тесные взаимосвязи трех регуляторных систем (нервной, эндокринной, иммунной) обусловлены анатомо-физиологическим феноменом их представительства в каждом висцеральной органе через пептид/аминергические нейроны, иммунокомпетентные клетки и апудоци-ты.

Учитывая это, представилось возможным расширить понятие «диффузная нейроэндокринная система», заменив его понятием «диффузная нейроэндокринная система», и рассматривать ее как единую функциональную биологическую систему [Кветной И. М, Ингель И. Е, 2000; Кветной И. М, Южаков В. В, 2001; Кветной И. М. и соавт, 2001].

Можно предполагать, что у гипофизэктомированных цыплят и кур отчасти функцию гипофиза, а, следовательно, и первичного регулятора клеточного и гуморального иммунитета берёт на себя АПУД-система, а точнее ДНЭС.

Все представленные данные свидетельствуют о чрезвычайно важной функции гипофиза в регуляции клеточного и гуморального иммунитета, свёртывания крови и фибринолиза.