Вступление. 
Генетические маркеры антиоксидантной защиты у детей, рожденных благодаря вспомогательным репродуктивным технологиям

Вспомогательные репродуктивные технологии (ВРТ) в последнее время становятся востребованными все больше, в связи с чем все чаще в практике педиатра встречаются дети, рожденные благодаря экстракорпоральному оплодотворению (ЭКО). На данный момент существует много работ, описывающих здоровье таких детей. В основном это антропометрические показатели, которые не отличаются от данных детей, рожденных естественным путем (ЕП). Также встречаются исследования заболеваемости, где данные разных исследователей противоречивы. Наиболее часто встречаются исследования врожденных пороков развития, которые показывают большую частоту их возникновения у детей, рожденных благодаря ВРТ, чем у детей, зачатых ЕП. В то же время в меньшей степени изучены генетические факторы патологических процессов, которые могут привести к различным неблагоприятным последствиям. Данные исследования начали проводить последние пять лет методом предимплантационной генетической диагностики (ПГД) с целью обеспечения рождения генетически здорового ребенка. T. Richard et al. исследовали эмбрионы на разных стадиях развития — от момента трансвагинальной пункции до 5 дня и учитывали аномалии развития 21 хромосомы [5]. Метод генетического скрининга ПГД позволяет исключить вероятность рождения ребенка, имеющего грубые аномалии развития, но, к сожалению, не исключает полностью возможности развития других патологических состояний, таких, как влияние метилирования ДНК на физическое и психическое развитие ЭКО-детей [1, 7], мутация гена, отвечающего за протромбин [4], или р-талассемия [6].

В настоящее время уделяют значительное внимание нарушениям в энергетическим обмене у детей, рожденных благодаря ВРТ. Имеются работы, рассматривающие генетические дефекты митохондриального состава клетки, вследствие которых при нарушении функции митохондрий возникает патология энергетического обмена в клетках с момента оплодотворения [8]. N. Kimura et al. в своей работе указывают на то, что эмбрионы со 2-го дня жизни в стрессовой ситуации подвержены значительному риску при наличии патологических изменений в структуре SOD-2 гена [2]. K. Komatsu et al. в своем исследовании указывают на взаимосвязь активности перекисного окисления липидов и мутации SOD-2 фрагмента ДНК [3].

Цель исследования — изучить эффективность и оценить возможности использования генетических методов исследования ферментов, отвечающих за антиоксидантную защиту у детей, рожденных благодаря ВРТ, а также определить возможное влияние выявленных нарушений на состояние здоровья детей данной группы.

Материалы и методы. В исследовании принимали участие 45 детей основной группы, рожденных благодаря ВРТ, и 20 детей контрольной группы, рожденных после спонтанной беременности (Сб). Для оценки состояния антиоксидантной системы исследовали гены, детерминирующие активность важнейших ферментов этой системы: SOD-2 (супероксиддисмутазы), находящейся непосредственно в митохондриях, и САТ (каталазы). Также представлялось целесообразным оценить состояние HIF (гипоксически-индуцированного фактора) — транскрипционного фактора, обеспечивающего повышение экспрессии VEGF (факторов роста эндотелия сосудов) и рецепторов VEGF в ответ на уменьшение содержания кислорода (гипоксию), участвующего в анаэробном метаболизме, регулирующего выработку кислорода АТФ с помощью окислительного фосфорилирования, принимающего участие в ангиогенезе (кроме этого, HIF-1 изменяет экспрессию генов, контролирующих транспорт глюкозы и гликолиз, что обеспечивает адаптацию клеток к условиям гипоксии). Материал для генетического исследования забирался при помощи буккального соскоба.

Для проведения данных исследований использовали полимеразную цепную реакцию генов, отвечающих за функцию этих ферментов. При этом были получены такие варианты ответов: ген не имеет мутации, присутствует гетерозиготная или гомозиготная мутация. При наличии данных лабораторных исследований был проведен сравнительный анализ влияния патологических мутаций на развитие и состояние здоровья детей.

Полученные результаты обрабатывали с помощью параметрических и непараметрических методов с вычислением среднего арифметического значения, стандартного отклонения. Для оценки соответствия распределения генотипов ожидаемым значениям использовали критерий Пирсона (х²), при отсутствии нормального распределения — Манна-Уитни. Проводили расчеты величины относительного риска (RR) и отношения шансов (OR). Силу ассоциаций оценивали по показателям этиологической (ЕФ, при RR>1) или превентивной (ПФ, при RR<1) фракции. Разницу считали достоверной при р<0,05.

Статистическую обработку материалов проводили с применением пакета программ «EXCEL for windows», «STATISTICA 7.0 for windows».