Вопрос №50 «питательные среды и растворы, используемые в вирусовлогии. 
Требования к посуде для культивирования кк, ее обработка»

Наиболее широко используют при работе с КК растворы Хенкса и Эрла, которые готовят на бидистиллированной воде с добавлением различных солей и глюкозы. Эти сбалансированные солевые растворы используют для приготовления всех питательных сред, т.к. они обеспечивают сохранение рН, осмотическое давление в клетках и соответствующую концентрацию необходимых неорганических веществ. Их же применяют для отмывания от ростовых сред, разведений вируса и другого. При культивировании клеток применяют диспергирующие растворы трипсина и версена. Раствор трипсина используют для разделения кусочков тканей на отдельные клетки и для снятия слоя клеток со стекла. Раствор версена — используют для снятия клеток со стекла. Питательные среды (далее ПС) — различают: 1) естественные среды, которые состоят из смеси солевого раствора, сыворотки крови, тканевого экстракта, коровьей амниотической жидкости и др. Количество компонентов варьирует. Используют их редко. 2) искусственные ПС — ферментативные гидролизаты различных белковых продуктов: гидролизат лактальбумина, мышечный ферментативный гидролизат и др. Из синтетических сред наиболее широкое применение нашли среда 199 и среда Игла. Во все питательные среды и некоторые солевые растворы добавляют индикатор феноловый красный для определения концентрации водородных ионов. Для уничтожения микрофлоры перед использованием в среды добавляют АБ: пенициллин и стрептомицин по 100ЕДмл. Все ПС делят на 2 группы: ростовые — обеспечивают жизнь и размножение клеток; поддерживающие — обеспечивающие жизнедеятельность клеток, но не их размножение (они не содержат сыворотки крови). Посуда — качество посуды имеет важное значение для успешного культивирования клеток вне организма. Она дб стерильной, обезжиренной, не обладать токсическим действием. Для культивирования клеток используют пробирки, матрасы на 50, 100, 250, 500, 1000, 1500 мл, роллерные колбы на 500, 1000, 2000 мл, различные пипетки, флаконы для ПС и растворов, колбы различной вместимости. Обработка стеклянной посуды состоит из нескольких этапов: 1) инфицированную посуду погружают в 2−3% раствор NaOH на 5−6 часов; 2) споласкивают в 3−4 сменах водопроводной воды; 3) замачивают в 0,3−0,5% растворе порошка; 4) тщательно моют с помощью ерша в теплом растворе порошка; 5) споласкивают в нескольких сменах водопроводной воды; 6) споласкивают в дистиллированной воде, содержащей 0,5% HCl; 7) споласкивают 4−5 раз водопроводной водой и в 3 сменах дистиллированной воды; 8) сушат в сушильном шкафу; 9) монтируют и стерилизуют в сушильном шкафу или автоклавируют.