Молекулярно-генетические исследования. 
Молекулярно-генетические и некоторые биохимические аспекты болезни Паркинсона

Данная часть исследований проведена в Центре геномных технологий (ЦГТ) при Институте генетики и экспериментальной биологии растений (ИГиЭБР) Академии наук Республики Узбекистан (АН РУз). В рамках исследования был проведен анализ на наличие ассоциаций с болезнью Паркинсона: полиморфизма генов GSTM1 (нулевая аллель), GSTT1 (нулевая аллель) у представителей узбекской национальности (сравнение состояний генотипа по исследуемым полиморфизмам больных и здоровых по болезни Паркинсона). Материалом для ДНК служила венозная кровь из локтевой вены объемом 1 мл.

Выделение ДНК проводилось по стандартному протоколу выделения ДНК с использованием набора реагентов Diatom™ DNA Prep 200 (производство ООО «Лаборатория ИзоГен»).

Супернатант с ДНК далее подвергался непосредственно генотипированию путем ПЦР-амплификации. Типирование образцов ДНК по генам GSTM1 и GSTT1 проводили с использованием двух пар специфических олигонуклеотидных праймеров с участками генов GSTM1 (F: 5'-tgs-ttc-acg-tgt-tat-gga-ggt-tc; R: 3'-gtt-ggg-ctc-aaa-tat-acg-gtg-g) и GSTT1 (F: 5'-ggt-cat-tct-gaa-ggc-caa-gg; R: 3'-ttt-gtg-gac-tgc-tga-gga-cg). ПЦР-анализ проводили с использованием набора реагентов для ПЦР-амплификации ДНК GenePak™ PCR Core (производство ООО «Лаборатория ИзоГен»).

Гомозиготность по нулевым аллелям (0/0) генов GSTM1 и GSTT1 определяли по отсутствию на электрофореграммах фрагментов размером 131 и 114п.н. соответственно. Наличие этих фрагментов свидетельствовало о присутствии по крайней мере одной нормальной (без делеции) копии генов (гомои гетерозиготы, +/+ и +/0). Нулевые аллели генов GSTM1 и GSTT1 свидетельствовали, в свою очередь, о предрасположенности объекта к БП. Для определения размера фрагментов ДНК использовался маркер с начальной отметкой 100 п.н.

Содержание НСЕ в сыворотке крови больных определялось методом иммуноферментного анализа, выполняемого с помощью специфических тест-систем, разработанных на основе соответствующих моноклональных антител, на анализаторе «ALISA» согласно инструкции, прилагаемой к набору. Забор пробы крови осуществлялся из локтевой вены утром натощак в лаборатории ЦП № 2 МСО при МЗ РУз. Данное исследование проведено у 35 пациентов, в том числе у 17 (48,57%) женщин и 18 (51,42%) мужчин с длительностью заболевания от 1 года до 15 лет.

В последующем проводилась сравнительная оценка результатов анализов НСЕ у больных по полу, возрасту, а также в зависимости от формы, стадии, темпа прогрессирования заболевания.