Выводы. 
Молекулярно-генетические особенности структуры генов патогенности возбудителей коклюша и дифтерии; совершенствование лабораторной диагностики этих инфекций

1. Мониторинг штаммов B. pertussis выявил особенности распространения и различия в генетической структуре штаммов, циркулирующих в различные периоды эпидемического процесса коклюшной инфекции, и показал, что в допрививочный период (1948 — 1959 гг.) и первые десять лет (1960 — 1969 гг.) проведения массовой иммунизации детского населения АКДС-вакциной, циркулировали штаммы B. pertussis с «вакцинными» аллелями генов, кодирующих основные факторы патогенности; в начале 70-х годов в популяции штаммов B. pertussis появились штаммы с новыми «невакцинными» аллелями генов, которые с начала 80-х годов заняли доминирующее положение в популяции.

2. Выявлены особенности генетической структуры штаммов B. pertussis, выделенных на современном этапе эпидемического процесса коклюшной инфекции. В настоящее время циркулируют штаммы B. pertussis с новым «невакцинным» ptxА1 аллелем гена коклюшного токсина (в 100% случаев), новыми «невакцинными» prn2 и prn3 аллелями гена пертактина (в 76,0% и 21,9% случаев, соответственно); распространение штаммов с «невакцинными» fim2−2 и fim3 В аллелями фимбриальных генов происходит медленнее и встречается в популяции современных штаммов в 53,3% и в 83,4% случаев, соответственно. Изменений в структуре tcfA гена, кодирующего фактор колонизации трахеи, не обнаружено.

3. Современные штаммы B. pertussis, несущие новые «невакцинные» аллели, и вакцинные штаммы B. pertussis, используемые для производства АКДС-вакцины и несущие старые «вакцинные» аллели генов коклюшного токсина, пертактина и фимбриальных белков, имеют существенные различия генетической структуры. У современных штаммов B. pertussis произошли существенные изменения в структуре ptxA гена, кодирующего S1 субъединицу коклюшного токсина, prn гена, кодирующего пертактин, и в фимбриальном fim3 гене, кодирующем Fim3 белок.

4. Штаммы B. pertussis, характеризующиеся новыми «невакцинными» аллелями генов патогенности, обладают высокой степенью вирулентности (в 72,7% случаев) и высоким уровнем лейкоцитозстимулирующей активности (в 100% случаев), что является неблагоприятным прогностическим признаком тяжести течения инфекционного процесса коклюшной инфекции.

5. Разработан новый метод мониторинга штаммов B. pertussis на основе ПЦР-ПДРФ, позволяющий выявлять штаммы с новым ptxА1 аллелем гена коклюшного токсина, для наблюдения за популяцией B. pertussis, циркулирующей на современном этапе развития эпидпроцесса коклюшной инфекции.

6. Показаны высокая специфичность (100%), высокая чувствительность (10³ м.кл.), высокая диагностическая эффективность (84,9% ± 4,9% (р < 0,001) нового впервые разработанного прямого ускоренного метода (LAMP-вариант), позволяющего выявлять возбудителя заболевания непосредственно из клинического материала больного в течение 9 — 10 часов. Данный метод позволяет обследовать больных как в ранние (с 3 дня), так и в поздние (в течение месяца) сроки заболевания, а также больных с различными формами клинического течения заболевания.

7. Подтверждено сохранение в циркуляции штаммов C. diphtheriae (в 66,7% случаях) с незначительными множественными единичными мутациями в tox гене, не приводящими к изменению первичной структуры белка дифтерийного токсина, что влияет на формирование генетической вариабельности вида. Мониторинг штаммов C. diphtheriae показал, что распространения штаммов C. diphtheriae с измененной структурой гена дифтерийного токсина (в положении 1252 tox гена), приводящей к изменению аминокислотного состава белка дифтерийного токсина, не произошло.

8. Получены новые знания о том, что в геноме C. diphtheriae биовара gravis имеется нуклеотидная последовательность (локус DIP0357 — amy ген), являющаяся генетической детерминантой, кодирующей амилазную активность — дополнительный фактор патогенности C. diphtheriae биовара gravis, и впервые определена нуклеотидная «мишень» в amy гене, выявляемая в ПЦР новыми сконструированными специфическими праймерами, для дифференциации штаммов C. diphtheriae двух биоваров, что имеет значение для создания диагностических препаратов.