Лабораторные методы диагностики
Биопроба на мышах Для биопробы используются мышата-сосуны или отъемыши весом 8−12 г. Мышей в количестве 6−10 штук заражают 10%-й суспензией патологического материала, при этом половину из них заражают нтрацеребрально в дозе 0,015−0,03 мл, остальных — подкожно в область верхней губы в дозе 0,1−0,2 мл. Предпочтительнее использовать мышат-сосунов, так как они более чувствительны. Гибель мышей… Читать ещё >
Лабораторные методы диагностики (реферат, курсовая, диплом, контрольная)
Для диагностики бешенства используют такие методы, как иммуноферментный анализ (ИФА), полимеразная цепная реакция (ПЦР), выделение вируса на культуре клеток. Наиболее широко используется реакция иммунофлюоресценции (РИФ) в сочетании с биопробой на мышах.
Бешенство можно диагностировать в свежем, замороженном, консервированном в глицерине или формалине материале, в материалах, залитых в парафин.
РИФ Сущность данного метода заключается в соединении меченых антител со специфическим антигеном с образованием светящихся комплексов антиген-антитело.
Из каждого отдела головного мозга готовят по два препарата мазка-отпечатка (не допускаются для исследования пробы, фиксированные этиловым спиртом, формалином и другими средствами, вызывающими разрушение антигена или создающими дополнительный фон свечения).
Препараты высушивают на воздухе и фиксируют в охлажденном ацетоне при +4 или — 12 °C в течение 4−12 часов, после чего извлекают из ацетона, высушивают на воздухе 10 — 15 минут и помещают во влажную камеру (чашку Петри с увлажненным дном). Диагностический антирабический флюоресцирующий иммуноглобулин (ДАФИ) в рабочем разведении наносят равномерно на всю поверхность препарата при помощи пипетки, закрывают камеру с препаратами, помещают в термостат и выдерживают 30 минут при 37 °C. Затем предметные стекла с препаратом троекратно промывают, погружая их каждый раз на 10 минут в сосуд, наполненный фосфатным буфером рН 7,4, промывают дистиллированной водой в течение 5 мин и высушивают на воздухе. На окрашенные препараты наносят нефлюоресцирующее масло или помещают покровное стекло (в зависимости от типа используемого микроскопа). Подготовленные препараты просматривают под люминесцентным микроскопом.
При положительных результатах исследования в препаратах обнаруживают разной величины и формы светящиеся желто-зеленым цветом гранулы в нейронах и вне клеток. Размер их колеблется от едва заметных в виде песчинок образований до 15 — 20 мм. Не пораженная вирусом бешенства мозговая ткань светится серовато-желтым или зеленоватым цветом. Чувствительность метода, по различным данным, составляет 98−100%. РИФ часто ставят параллельно с биопробой на мышах.
Биопроба на мышах Для биопробы используются мышата-сосуны или отъемыши весом 8−12 г. Мышей в количестве 6−10 штук заражают 10%-й суспензией патологического материала, при этом половину из них заражают нтрацеребрально в дозе 0,015−0,03 мл, остальных — подкожно в область верхней губы в дозе 0,1−0,2 мл. Предпочтительнее использовать мышат-сосунов, так как они более чувствительны. Гибель мышей в первые 24−48 часов не учитывают, так как чаще всего они погибают по другим причинам (бактериальная контаминация инокулята, его токсичность, травма во время заражения и т. д.). Наблюдение проводят не меньше 30 дней. Диагноз набешенство не может быть поставлен только на основании клинических признаков, поэтому головной мозг погибших мышей исследуют в РИФ.