Материалы и методы

Объект исследования

В качестве объекта исследования использовались самки белых лабораторных крыс, массой 200−240г. Исследовали 2 группы животных: контрольную группу и группу животных с введённым СCl4.

Экспериментальную модель окислительного стресса создавали следующим образом: крысе с помощь специального зонда в желудок вводили раствор СCl4 в вазелиновом масле (1 мл/кг веса).

Показатели ПОЛ оценивали спектрофотометрически через 24 часа после введения ССl4 по содержанию малонового диальдегида (МДА) и диеновых конъюгатов (ДК) в плазме крови и гомогенатах тканей: печени, почек и мозге. Также в ходе работы определяли содержание белка в тканях и активность аланинаминотрансферазы (АлАт) у обеих групп животных.

Определение содержания диеновых конъюгатов

Определение содержания первичных продуктов ПОЛ — диеновых конъюгатов, осуществляли спектрофотометрически в экстрагированной гептановой фазе липидов при 233 нм.

Принцип метода:

Вследствие р-р переходов спектры коньюгированных гидроперекисей полиненасыщенных жирных кислот характеризуются интенсивным поглощением в ультрафиолетовой области спектра с максимумом при 232−234 нм (Каган и др., 1986).

Реактивы:

• 1. гептан-изопропанольная смесь в соотношении 1:1;
• 2. 0,74%-ный водный раствора KCl.

Оборудование: спектрофотометр СФ-46.

Ход определения:

Определение содержания диеновых коньюгатов (ДК) проводили в плазме крови и гомогенатах тканей внутренних органов: печени, почках и мозге. Для этого липиды экстрагируют стократным избытком смеси растворителей. В гомогенизатор вносят 0,1 мл плазмы или гомогената, добавляют 5 мл изопропилового спирта и тщательно растирают до получения гомогенной суспензии. Содержимое гомогенизатора количественно переносят в мерную центрифужную пробирку, в которую затем добавляют 5 мл гептана.

Экстракт центрифугируют в течение 10 мин при при 3000 об/мин. (1700g). Надосадочную фракцию переносят в градуированную пробирку и добавляют 1/5 объема раствора KCl для отмывки липидного экстракта от нелипидных примесей. После тщательного встряхивания образовавшаяся эмульсия расслаивалась на две прозрачные фазы. В гептановом экстракте (верхняя фаза) измеряют спектрофотометрически содержание сопряженных диенов в кювете с длиной оптического пути 1,0 см против гептана. Расчёт количества ДК производят с учетом молярного коэффициента экстинкции:

С (моль / г ткани) = D · F · / K · m.

C (моль / л плазмы) = D · F · / K,.

где С — содержание ДК;

D — оптическая плотность гептанового экстракта;

F — фактор разведения, равный 121,2;

K — коэффициент молярной экстинкции для ДК при длине волны 233 нм, равный 27 000 М-1см-1 (Паранич и др., 1993);

m — масса образца, г;