Методики проведения идентификационных тестов

Хромогенность. Для оценки способности выделенных штаммов реагировать на освещение образованием каротиноидных пигментов проводили посев каждого штамма на 2 чашки со средой Lцwenstein-Jensen с желточной эмульсией. Культивирование проводили в темноте при комнатной температуре в течение 7 суток. Далее одну из чашек доставали и экспонировали несколько дней под лампой 60вт на расстоянии 25 см. По истечении 7 суток обе чашки сравнивали между собой. Штаммы, не синтезирующие пигменты при освещении, считали нехромогенными. Штаммы, синтезирующие пигмент при световой стимуляции, относили к хромогенным. микобактерия заболевание водопроводная аквариумистика.

Скорость роста. Для отнесения выделенных штаммов к быстро растущим или к медленно растущим видам микобактерий их высевали на среду Lцwenstein-Jensen с желточной эмульсией методом истощающего мазка для получения единичных колоний. Штамм считали быстро растущим, если в течение 7 дней появлялись хорошо различимые колонии с индивидуальными свойствами. Если такие колонии формировались позже, штамм считали медленно растущим.

Способность к росту при различных температурах. Культивирование проводили на среде Lцwenstein-Jensen с желточной эмульсией при 28⁰, 37⁰, 42⁰ и 45⁰С. Засев проводили истощающим мазком. Результаты теста считали положительными, если на 7−14 сутки появлялись колонии типичной формы.

Арилсульфатазный тест. Положительный ответ в этом тесте характерен практически для всех представителей рода Mycobacterium. Тест ставили на 3 и 14 сутки культивирования при 28⁰С. Для постановки теста в среду Lцwenstein-Jensen с желточной эмульсией вводили субстрат — фенолфталеин дисульфат до конечной концентрации — 0,001 М. Питательную среду разливали столбиками, засев исследуемых штаммов проводили суспензией на поверхность столбика. По истечении времени культивирования на поверхность тестируемых посевов вносили по 6 капель 2N раствора Na₂CO₃. Регистрацию проводили в первые 30 минут. В случае положительной реакции на поверхности питательной среды появлялась розово-красная полоска.

Рост в присутствии 5% NaCl. Тест проводили на среде Lцwenstein-Jensen с желточной эмульсией и 5%NaCl при 28⁰С. Засев осуществляли истощающим мазком. Тест считали положительным, если через 7−14 (28) дней формировались типичные колонии.

Способность использовать различные источники углерода (инозит, маннит и цитрат) в присутствии аммонийного азота. Для данного теста готовили минеральную среду следующего состава (г/л): (NH₄)₂SO_4-2,4 г, KH₂PO_4-0,5 г, MgSO_4-0,5 г, агар-агар -20,0 г. Источники углерода (5−7 г/л) растворяли в стерильной дистиллированной воде, пастеризовали и добавляли в среду. Засев проводили на поверхность питательной среды в чашки Петри истощающим штрихом. Культивирование проводили при 28⁰С в течение 14 дней.

Каталазный тест (полуколичественный).

Для постановки теста штаммы выращивали на поверхности столбиков среды Lцwenstein-Jensen с желточной эмульсией при 28⁰С 14 дней. Для проверки наличия каталазы и ее активности на поверхность столбиков приливали 1 мл реагента — смесь 1:1−10% Твин 80 и 30% перекиси водорода (3таблетки гидроперита в 5 мл воды). Реакцию регистрировали в первые 5 минут. Возможны следующие варианты реакции: 1) отсутствие вспенивания (микобактерии не образуют каталазу), 2) вспенивание интенсивное, столбик пены более 45 мм, 3) вспенивание слабое, столбик пены менее 45 мм.