Спектрофотометрическое определение суммы стеринов

Для спектрофотометрического определения суммы стеринов используют несколько реакций:

а) реакция с реактивом Либермана — Бурхарда. Хлороформный раствор неомыляемой фракции липидов смешивают с равным объемом реактива, состоящего из уксусного ангидрида с добавлением концентрированной серной кислоты. При этом развивается окрашивание от зеленого до голубого, в зависимости от типа стерина. Концентрацию стеринов определяют спектрофотометрическим или колориметрическим методом [см.: 28, с. 87].

Недостатком данного метода является то, что в экстракте могут находиться мешающие компоненты, которые дают ложноположительную реакцию. Для избавления от данных артефактов рекомендуется перед проведением реакции провести разделение компонентов с помощью ТСХ и элюировать зону, соответствующую стандарту стеринов. Обычно каротиноиды перемещаются с фронтом растворителя, нестероидные компоненты, реагирующие с реактивом, остаются на старте, а стерины находятся в средней части хроматограммы;

• б) реакция стеринов с формальдегидом и серной кислотой. В данной реакции развивается окрашивание вишневого цвета. Концентрацию стеринов определяют спектрофотометрически [см.: 25, с. 168];
• в) определение концентрации стеринов по поглощению в УФспектре [см.: 28, с. 87]. Данный метод дает ненадежные результаты, так как имеется множество соединений, которые также поглощают свет в УФ-области и мешают анализу.

Газо-жидкостная хроматография стеринов

Метод является наиболее точным и распространенным при анализе стеринов. Однако стерины обладают низкой летучестью, поэтому для эффективной газо-жидкостной хроматографии этих липидов необходимо провести их модификацию путем метилирования диазометаном или борирования.