ΠΠ΅Ρ
Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌ.
Π€ΠΎΡΠΌΡ ΠΊΠ°ΡΠΈΠΎΡΠΈΠΏΠΎΠ²
ΠΠ»Π°Π·ΠΌΠΈΠ΄ΠΎΠΉ ΠΊΠΎΠ΄ΠΈΡΡΠ΅ΡΡΡ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Π°, ΡΠ°Π·ΡΠ΅Π·Π°ΡΡΠ°Ρ ΠΎΠ΄Π½Ρ ΠΈΠ· Π½ΠΈΡΠ΅ΠΉ Π΅Ρ ΠΠΠ Π² ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»ΡΠ½Π½ΠΎΠΉ ΡΠΎΡΠΊΠ΅ (oriT). ΠΠ°ΡΠ΅ΠΌ ΡΠ°Π·ΡΠ΅Π·Π°Π½Π½Π°Ρ ΡΠ΅ΠΏΡ ΡΠ°ΡΠΊΡΡΡΠΈΠ²Π°Π΅ΡΡΡ ΠΈ 5'-ΠΊΠΎΠ½ΡΠΎΠΌ ΠΏΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΎΡΠΈΡΡΡ Π² ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΡ-ΡΠ΅ΡΠΈΠΏΠΈΠ΅Π½Ρ. ΠΡΠ΄Π²ΠΈΠ³Π°Π»ΠΎΡΡ ΠΏΡΠ΅Π΄ΠΏΠΎΠ»ΠΎΠΆΠ΅Π½ΠΈΠ΅, ΡΡΠΎ ΠΠΠ ΠΏΠ΅ΡΠ΅Π΄Π°ΡΡΡΡ ΠΏΠΎ ΠΊΠ°Π½Π°Π»Π°ΠΌ Π² ΠΏΠΎΠ»ΠΎΠ²ΡΡ ΠΏΠΈΠ»ΡΡ , Π½ΠΎ ΠΊ Π½Π°ΡΡΠΎΡΡΠ΅ΠΌΡ Π²ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½ΠΈ ΠΏΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π½ΠΎ, ΡΡΠΎ ΠΏΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΎΡ ΠΈΠ΄ΡΡ ΡΠ΅ΡΠ΅Π· ΠΏΠΎΡΡ Π² ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΡΠ΅Π½ΠΊΠ΅. Π ΠΏΠ΅ΡΠ²ΠΎΠΌ ΡΠ΅Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΠ΅ ΠΏΠΎΡΡΡΠΏΠ°ΡΡΠ΅ΠΉ Π² ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΡ ΡΠ΅ΡΠΈΠΏΠΈΠ΅Π½ΡΠ° Π½ΠΈΡΠΈ ΠΠΠ… Π§ΠΈΡΠ°ΡΡ Π΅ΡΡ >
ΠΠ΅Ρ Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌ. Π€ΠΎΡΠΌΡ ΠΊΠ°ΡΠΈΠΎΡΠΈΠΏΠΎΠ² (ΡΠ΅ΡΠ΅ΡΠ°Ρ, ΠΊΡΡΡΠΎΠ²Π°Ρ, Π΄ΠΈΠΏΠ»ΠΎΠΌ, ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠΎΠ»ΡΠ½Π°Ρ)
ΠΠ»Ρ ΡΡΠΏΠ΅ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΡΡΠ°Π½ΠΎΠ²Π»Π΅Π½ΠΈΡ ΠΊΠΎΠ½ΡΠ°ΠΊΡΠ° Π΄Π²ΡΡ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΠΊ Π² ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΠ΅-Π΄ΠΎΠ½ΠΎΡΠ΅ Π΄ΠΎΠ»ΠΆΠ½Π° ΠΏΡΠΈΡΡΡΡΡΠ²ΠΎΠ²Π°ΡΡ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠ³Π°ΡΠΈΠ²Π½Π°Ρ (ΠΏΠΎΠ»ΠΎΠ²Π°Ρ, ΡΡΠ°Π½ΡΠΌΠΈΡΡΠΈΠ²Π½Π°Ρ) ΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠΈΠ΄Π°. ΠΠ΅ΡΠ²ΠΎΠΉ ΠΈΠ· Π½ΠΈΡ Π±ΡΠ»Π° ΠΎΡΠΊΡΡΡΠ° F-ΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠΈΠ΄Π°: ΡΠΏΠΈΡΠΎΠΌΠ° (ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±Π½Π°Ρ Π²ΡΡΡΠ°ΠΈΠ²Π°ΡΡΡΡ Π² Π±Π°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΠ°Π»ΡΠ½ΡΡ Ρ ΡΠΎΠΌΠΎΡΠΎΠΌΡ), Π΄Π»ΠΈΠ½ΠΎΠΉ ΠΎΠΊΠΎΠ»ΠΎ 100 ΡΡΡ. ΠΏΠ°Ρ ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΉ. ΠΠ»Π°Π·ΠΌΠΈΠ΄Π° Π½Π΅ΡΡΡ Π³Π΅Π½Ρ, ΠΊΠΎΠ΄ΠΈΡΡΡΡΠΈΠ΅ ΡΡΠ΄ ΡΡΠ½ΠΊΡΠΈΠΉ. ΠΠ΄Π½Π° ΠΈΠ· Π½ΠΈΡ — ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ ΠΏΠΎΠ»ΠΎΠ²ΡΡ ΠΏΠΈΠ»Π΅ΠΉ, ΠΎΡΠ²Π΅ΡΠ°ΡΡΠΈΡ Π·Π° ΠΏΡΠΈΠΊΠ»Π΅ΠΏΠ»Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΊ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΠ΅-ΡΠ΅ΡΠΈΠΏΠΈΠ΅Π½ΡΡ.
ΠΠΎΠ½ΡΡΠ³Π°ΡΠΈΠ²Π½ΡΠ΅ ΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠΈΠ΄Ρ ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ ΠΊΠΎΠ΄ΠΈΡΡΡΡ Π±Π΅Π»ΠΊΠΈ, ΠΏΡΠΎΡΠΈΠ²ΠΎΠ΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΡΡΡΠΈΠ΅ ΠΏΡΠΈΠΊΡΠ΅ΠΏΠ»Π΅Π½ΠΈΡ ΠΏΠΈΠ»Π΅ΠΉ Π΄ΡΡΠ³ΠΈΡ Π±Π°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΠΉ ΠΊ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΡΠ΅Π½ΠΊΠ΅ Π΄Π°Π½Π½ΠΎΠΉ. ΠΠΎΡΡΠΎΠΌΡ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΠΈ, ΡΠΆΠ΅ ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠ°ΡΠΈΠ΅ ΡΡΠ°Π½ΡΠΌΠΈΡΡΠΈΠ²Π½ΡΠ΅ ΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠΈΠ΄Ρ, Π½Π° Π½Π΅ΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ ΠΏΠΎΡΡΠ΄ΠΊΠΎΠ² ΡΠ΅ΠΆΠ΅ Π²ΡΡΡΡΠΏΠ°ΡΡ Π² ΡΠΎΠ»ΠΈ ΡΠ΅ΡΠΈΠΏΠΈΠ΅Π½ΡΠΎΠ² ΠΏΡΠΈ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠ³Π°ΡΠΈΠΈ.
ΠΠ»Π°Π·ΠΌΠΈΠ΄ΠΎΠΉ ΠΊΠΎΠ΄ΠΈΡΡΠ΅ΡΡΡ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Π°, ΡΠ°Π·ΡΠ΅Π·Π°ΡΡΠ°Ρ ΠΎΠ΄Π½Ρ ΠΈΠ· Π½ΠΈΡΠ΅ΠΉ Π΅Ρ ΠΠΠ Π² ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»ΡΠ½Π½ΠΎΠΉ ΡΠΎΡΠΊΠ΅ (oriT). ΠΠ°ΡΠ΅ΠΌ ΡΠ°Π·ΡΠ΅Π·Π°Π½Π½Π°Ρ ΡΠ΅ΠΏΡ ΡΠ°ΡΠΊΡΡΡΠΈΠ²Π°Π΅ΡΡΡ ΠΈ 5'-ΠΊΠΎΠ½ΡΠΎΠΌ ΠΏΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΎΡΠΈΡΡΡ Π² ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΡ-ΡΠ΅ΡΠΈΠΏΠΈΠ΅Π½Ρ. ΠΡΠ΄Π²ΠΈΠ³Π°Π»ΠΎΡΡ ΠΏΡΠ΅Π΄ΠΏΠΎΠ»ΠΎΠΆΠ΅Π½ΠΈΠ΅, ΡΡΠΎ ΠΠΠ ΠΏΠ΅ΡΠ΅Π΄Π°ΡΡΡΡ ΠΏΠΎ ΠΊΠ°Π½Π°Π»Π°ΠΌ Π² ΠΏΠΎΠ»ΠΎΠ²ΡΡ ΠΏΠΈΠ»ΡΡ , Π½ΠΎ ΠΊ Π½Π°ΡΡΠΎΡΡΠ΅ΠΌΡ Π²ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½ΠΈ ΠΏΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π½ΠΎ, ΡΡΠΎ ΠΏΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΎΡ ΠΈΠ΄ΡΡ ΡΠ΅ΡΠ΅Π· ΠΏΠΎΡΡ Π² ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΡΠ΅Π½ΠΊΠ΅. Π ΠΏΠ΅ΡΠ²ΠΎΠΌ ΡΠ΅Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΠ΅ ΠΏΠΎΡΡΡΠΏΠ°ΡΡΠ΅ΠΉ Π² ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΡ ΡΠ΅ΡΠΈΠΏΠΈΠ΅Π½ΡΠ° Π½ΠΈΡΠΈ ΠΠΠ ΡΠ°ΡΠΏΠΎΠ»ΠΎΠΆΠ΅Π½Ρ Π°Π½ΡΠΈΡΠ΅ΡΡΡΠΈΠΊΡΠΈΠΎΠ½Π½ΡΠ΅ Π³Π΅Π½Ρ. ΠΡΠΈ Π³Π΅Π½Ρ Π΄ΠΎΠ»ΠΆΠ½Ρ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠ±ΠΈΡΠΎΠ²Π°ΡΡΡΡ Π² ΡΠ΅ΡΠΈΠΏΠΈΠ΅Π½ΡΠ΅ ΡΡΠ°Π·Ρ ΠΆΠ΅ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅ ΡΠ²ΠΎΠ΅Π³ΠΎ ΠΏΠΎΡΡΡΠΏΠ»Π΅Π½ΠΈΡ ΡΡΠ΄Π°, ΡΡΠΎΠ±Ρ ΠΎΠ±Π΅ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΡ Π½Π°ΠΊΠΎΠΏΠ»Π΅Π½ΠΈΠ΅ Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ², Π±Π»ΠΎΠΊΠΈΡΡΡΡΠΈΡ ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡ ΡΠ°Π·ΡΡΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΠΠΠ ΡΠ΅ΡΡΡΠΈΠΊΡΠ°Π·Π°ΠΌΠΈ. ΠΠ°ΠΊΠΎΠ½Π΅Ρ, ΠΏΠ΅ΡΠ΅Π΄Π°Π½Π½Π°Ρ ΡΠ΅ΠΏΡ Π·Π°ΠΌΡΠΊΠ°Π΅ΡΡΡ Π² ΠΊΠΎΠ»ΡΡΠΎ ΠΈ Π½Π° Π΅Ρ ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π΅ Π²ΠΎΡΡΡΠ°Π½Π°Π²Π»ΠΈΠ²Π°Π΅ΡΡΡ Π΄Π²ΡΠ½ΠΈΡΠ΅Π²Π°Ρ ΡΡΡΡΠΊΡΡΡΠ° ΠΠΠ ΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠΈΠ΄Ρ. ΠΠ΅ΡΡ ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡ Π΄Π»ΠΈΡΡΡ Π½Π΅ΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ ΠΌΠΈΠ½ΡΡ.
ΠΠΎΠ½ΡΡΠ³Π°ΡΠΈΠ²Π½Π°Ρ ΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠΈΠ΄Π° ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ Π²ΡΡΡΠ°ΠΈΠ²Π°ΡΡΡΡ Π² Ρ ΡΠΎΠΌΠΎΡΠΎΠΌΡ ΠΏΡΡΡΠΌ Π³ΠΎΠΌΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΠ΅ΠΊΠΎΠΌΠ±ΠΈΠ½Π°ΡΠΈΠΈ Ρ ΡΡΠ°ΡΡΠΈΠ΅ΠΌ IS-ΡΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ². ΠΠΎΠ½ΡΡΠ³Π°ΡΠΈΡ ΠΏΡΠΈ ΡΡΠΎΠΌ ΠΈΠ΄ΡΡ ΠΏΠΎ ΡΠΎΠΌΡ ΠΆΠ΅ ΠΌΠ΅Ρ Π°Π½ΠΈΠ·Ρ, ΠΎΠ΄Π½Π°ΠΊΠΎ ΡΠ΅ΡΠΈΠΏΠΈΠ΅Π½ΡΡ ΠΏΠ΅ΡΠ΅Π΄Π°ΡΡΡΡ Π½Π΅ ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ ΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠΈΠ΄Π°, Π½ΠΎ ΠΈ Ρ ΡΠΎΠΌΠΎΡΠΎΠΌΠ½ΡΠΉ ΠΌΠ°ΡΠ΅ΡΠΈΠ°Π»Π° Π΄ΠΎΠ½ΠΎΡΠ°. Π ΡΡΠΎΠΌ ΡΠ»ΡΡΠ°Π΅ ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡ Π·Π°ΡΡΠ³ΠΈΠ²Π°Π΅ΡΡΡ Π½Π° ΡΠ°ΡΡ, ΡΠ°ΡΡΠΎ ΠΏΡΠΎΠΈΡΡ ΠΎΠ΄ΠΈΡ ΡΠ°Π·ΡΡΠ² ΠΏΠ΅ΡΠ΅Π΄Π°Π²Π°Π΅ΠΌΠΎΠΉ Π½ΠΈΡΠΈ ΠΠΠ. ΠΡΡΡΠΌ ΠΈΡΠΊΡΡΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΏΡΠ΅ΠΊΡΠ°ΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΠΏΠ΅ΡΠ΅Π΄Π°ΡΠΈ ΠΠΠ Π² ΡΠ°Π·Π½ΠΎΠ΅ Π²ΡΠ΅ΠΌΡ ΠΈ Π½Π°Π±Π»ΡΠ΄Π΅Π½ΠΈΡ Π·Π° ΡΠ΅ΠΌ, ΠΊΠ°ΠΊΠΈΠ΅ Π³Π΅Π½Ρ Π±ΡΠ»ΠΈ ΠΏΡΠΈ ΡΡΠΎΠΌ ΠΏΠ΅ΡΠ΅Π΄Π°Π½Ρ, Π±ΡΠ»Π° ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π½Π° ΠΊΠ°ΡΡΠ° Ρ ΡΠΎΠΌΠΎΡΠΎΠΌΡ ΠΊΠΈΡΠ΅ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΏΠ°Π»ΠΎΡΠΊΠΈ (E. coli) ΠΈ ΠΏΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π½ΠΎ Π΅Ρ ΠΊΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π²ΠΎΠ΅ ΡΡΡΠΎΠ΅Π½ΠΈΠ΅.
ΠΡΠΈ Π²ΡΡΠ΅ΠΏΠ»Π΅Π½ΠΈΠΈ ΠΈΠ· Ρ ΡΠΎΠΌΠΎΡΠΎΠΌΡ ΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠΈΠ΄Π° ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ Π·Π°Ρ Π²Π°ΡΡΠ²Π°ΡΡ Π΅Ρ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½Ρ ΠΈ ΠΏΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΎΡΠΈΡΡ Π΅Π³ΠΎ Ρ ΡΠΎΠ±ΠΎΠΉ Π² Π΄ΡΡΠ³ΡΡ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΡ (Π°Π½Π°Π»ΠΎΠ³ΠΈΡ Ρ ΡΡΠ°Π½ΡΠ΄ΡΠΊΡΠΈΠ΅ΠΉ). ΠΠ°Π½Π½ΡΠΉ ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡ Π½ΠΎΡΠΈΡ Π½Π°Π·Π²Π°Π½ΠΈΠ΅ ΡΠ΅ΠΊΡΠ΄ΡΠΊΡΠΈΠΈ.
ΠΠ΅ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠ΅ ΠΌΠ΅Π»ΠΊΠΈΠ΅ ΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠΈΠ΄Ρ, Π½Π°Π·ΡΠ²Π°Π΅ΠΌΡΠ΅ ΠΌΠΎΠ±ΠΈΠ»ΠΈΠ·ΡΠ΅ΠΌΡΠΌΠΈ, ΠΌΠΎΠ³ΡΡ Π±ΡΡΡ ΠΏΠ΅ΡΠ΅Π½Π΅ΡΠ΅Π½Ρ ΠΏΡΠΈ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠ³Π°ΡΠΈΠΈ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ Π°ΠΏΠΏΠ°ΡΠ°ΡΠ° ΠΏΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΎΡΠ° «Ρ Π΅Π»ΠΏΠ΅ΡΠ½ΠΎΠΉ» ΡΡΠ°Π½ΡΠΌΠΈΡΡΠΈΠ²Π½ΠΎΠΉ ΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠΈΠ΄Ρ. ΠΠ»Ρ ΡΡΠΎΠ³ΠΎ ΠΎΠ½ΠΈ Π΄ΠΎΠ»ΠΆΠ½Ρ ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠ°ΡΡ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ, Π°Π½Π°Π»ΠΎΠ³ΠΈΡΠ½ΡΠ΅ oriT ΠΊΠΎΠ½ΡΡΠ³Π°ΡΠΈΠ²Π½ΠΎΠΉ ΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠΈΠ΄Ρ ΠΈ ΡΠ°ΡΠΏΠΎΠ·Π½Π°Π²Π°Π΅ΠΌΡΠ΅ Π΅Ρ ΡΠ½Π΄ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Π°ΠΌΠΈ.