Оценка генетически обусловленных особенностей морфологических изменений в ядрах перитонеальных макрофагов in vitro

Широкое распространение гранулематозных заболеваний [4; 5; 6], диктует необходимость изучения механизмов развития хронического воспалительного процесса для разработки эффективных методов лечения. Ведущая роль в интеграции иммунокомпетентных клеток в гранулеме отводится макрофагам [4; 5]. Показана взаимосвязь между генотипом и характером иммунного ответа [3], однако генетические аспекты данного процесса во многих отношениях остаются не изученными [1; 2]. Изучение этих процессов in vitro на клетках, принадлежащих животным разных генетических линий, может дать возможность получения информации о реализации генетически детерминированного потенциала фагоцитов, что позволит учитывать особенности их функционирования при коррекции гранулематозных заболеваний [2].

Эксперимент проводили на культурах перитонеальных макрофагов мышей линий BALB/с, C57BL/6, CBA и DBA. Культуры инкубировали при температуре 37 С. Препараты фиксировали 50% раствором этанола и окрашивали азур — эозином. Результаты оценивали на 2, 24, 48 и 72 часа инкубации. Контрольные культуры инкубировали в течение 2 часов. Определяли численность ядер с выпячиваниями кариолеммы, содержание ядрышек в одном ядре и в одной клетке.

На указанные сроки инкубации во всех группах отмечали, что количество одноядерных клеток с ядрами, имеющими выпячивания кариолеммы в цитоплазму, превосходило число многоядерных фагоцитов по данному признаку. Различия в численности указанных клеток составляли от 1,5 до 3 раз в соответствующие периоды наблюдения. На 24 часа экспозиции концентрация одноядерных клеток с такими ядрами снижалась по сравнению с исходным уровнем (на 2 часа). Наибольшее абсолютное значение данного параметра у многоядерных клеток было зафиксировано в группе DBA на 24 часа экспозиции. Содержание ядрышек в одном ядре у одноядерных макрофагов было больше чем у многоядерных во всех используемых группах. Причем в зависимости от длительности экспозиции это соотношение увеличивалось и составляло для разных групп от 1,5 до 2,1.

Высокие исходные показатели отмечали в группах BALB/с и СВА — в 2,1 и в 2 раза, соответственно. У групп BALB/с, СВА и DBA соотношение числа одноядерных клеток к количеству многоядерных по содержанию ядрышек в ядре имела обратно пропорциональную зависимость от увеличения времени экспозиции. Во всех группах абсолютные показатели численности ядрышек в одном ядре у многоядерных клеток возрастали в зависимости от длительности инкубации. В одноядерных клетках такой закономерности не отмечали. Численность ядрышек в одной многоядерной клетке превосходило таковое в одной одноядерной, и имело тенденцию к возрастанию параллельно с увеличением времени экспозиции. В группах BALB/с, СВА и DBA число ядрышек в одной клетке возрастало в многоядерных фагоцитах параллельно с увеличением времени инкубации, а у одноядерных клеток такая особенность не наблюдалась.

Из вышесказанного следует, что относительные и абсолютные значения численности одноядерных макрофагов с ядрами, имеющими выпячивания в цитоплазму клетки, были больше чем у многоядерных фагоцитов. Среднее содержание ядрышек в ядре у одноядерных макрофагов превосходило этот показатель у многоядерных клеток. Отмеченные морфологические изменения ядра, а именно увеличение их объема за счет выпячивания кариолеммы в цитоплазму, вероятно, носили компенсаторный характер, что указывало на активацию белкового синтеза. Логично предположить, что многоядерным клеткам не требовались такие компенсаторные изменения по причине наличия нескольких ядер, и, следовательно, большей возможности для реализации белкового синтеза экстенсивным путем, за счет имеющихся потенциальных возможностей. Это подтверждается и большим содержанием ядрышек на один многоядерный макрофаг, несмотря на меньшее количество данных структур на одно ядро по сравнению с одноядерными клетками. Данное явление может наблюдаться при репаративной регенерации, либо компенсаторной гипертрофии. Выпячивание ядра в цитоплазму ведет к возрастанию поверхности этой структуры и свидетельствует о повышении синтетической функции в отношении белков и нуклеиновых кислот. Повышение численности ядрышек наиболее часто происходит при активизации белкового синтеза. Отмеченные изменения свидетельствуют об увеличении функциональной активности клеток.

Таким образом, полученные данные указывают на то, что для экспериментального моделирования очагов хронического воспаления in vitro с высоким уровнем активности фагоцитов, с целью детального изучения генетически детерминированных особенностей влияния многоядерных макрофагов на процессы хронического гранулематозного воспаления, наиболее перспективными следует считать культуры клеток от животных линии СВА и DBA.