Сравнительная оценка аллотрансплантации надпочечника и лимфатического узла в эксперименте

Накоплен большой экспериментальный и клинический материал по пересадке эндокринных желез, в том числе и надпочечников. Однако все еще не ясно, соответствует ли степень антигенности эндокринных органов степени антигенности других тканей. В связи с этим мы поставили перед собой задачу сравнить результаты аллотрансплантации надпочечника и лимфатического узла. лимфатический узел аллотрансплантат надпочечник Работа выполнена на 30 крысах — самцах линии Вистар. 20 животных составили опытную группу и 10 — контрольную. Крысам опытной группы под кожу передних конечностей от одного и того же донора справа подсаживался надпочечник, а слева брыжеечный лимфатический узел такого же веса, как и надпочечник. В качестве доноров использовались взрослые крысы линии Август. Опытные животные забивались по пять штук через 1, 3, 5 и 7 дней после операции. Подмышечные лимфатические узлы, регионарные к месту пересадки, взвешивали на торсионных весах. Отпечатки лимфоузлов окрашивали по Романовскому-Гимза и по Унна-Браше. Кроме этих методик, для выявления тучных клеток использовали альциановый синий при различных значениях рН, сафранин, комбинированное окрашивание альциановым синим — сафранином по Spicer, что позволяет разделить тучные клетки на 4 типа, различающиеся по степени зрелости. При окрашивании альционовым синим — сафранином тучные клетки проявляют сродство к одному из красителей, что связано с разной степенью сульфатации содержащихся в них мукополисахаридов (альциановое окрашивание обусловлено присутствием гиалуроновой кислоты и несульфатированных мукополисахаридов, сафранин связывается высокосульфатированными хондроитинсерными кислотами и гепарином).

Одновременно забивались крысы контрольной группы. При изучении лимфатических узлов (подмышечных, брыжеечных, парааортальных) животных контрольной группы клеточные формы лимфоидной ткани были разделены согласно существующей классификации на 3 основные группы. В интактных лимфоузлах пролимфоциты и лимфоциты фолликулярного типа составляют 98%. Остальные 2% клеточных элементов приходится на ретикулоэндотелиальные клетки и клетки крови. Пролимфоциты, легко отличимые по своей более светлой окраске от зрелых лимфоцитов, составляют 69−78% клеточного состава лимфоузла. Исследование цитограммы лимфоузлов контрольных животных показало, что тучные клетки составляют 0−0,2% всех клеточных форм. Чаще они встречаются периваскулярно в брыжеечных лимфоузлах, реже в подмышечных и еще реже в парааортальных. Большая часть гранул или все гранулы тучных клеток при окраске по Spicer дают сафранин — позитивное окрашивание. В связи с этим данные тучные клетки могут быть отнесены к 3 и 4 типу клеток, которые считаются зрелыми, окончательно дифференцированными формами.

Через 1 день после аллотрансплантации существенной разницы в цитограммах подмышечных лимфоузлов, регионарных к пересаженному надпочечнику и лимфоузлу, не найдено. В обоих случаях наблюдается увеличение веса регионарных лимфоузлов (р < 0,01). Значительно уменьшается количество пролимфоцитов, среди которых преобладают средние лимфоциты. Отмечается появление тучных клеток, которые выявляются при окраске по Романовскому-Гимза и по Унна-Браше. При окраске сафранином и по Spicer зернистость тучных клеток отличается обилием и густым расположением в цитоплазме, все гранулы сафранин — позитивны. В ряде случаев отмечалась дегрануляция тучных клеток.

Через 3 дня после операции существенной разницы в цитограммах подмышечных лимфоузлов, по-прежнему, не наблюдается. В обоих случаях продолжается увеличение зрелых лимфоцитов, среди которых основную массу составляют малые лимфоциты. Появляются лимфобласты, которые в контрольных отпечатках подмышечных лимфоузлов встречались редко (0,2%). Тучные клетки не выявляются при окраске по Романовскому-Гимза и при окраске альциановым синим, несколько лучше они видны при окраске по Унна-Браше и сафранином. При окраске по Spicer выявляются зрелые тучные клетки 3 и 4 типов.

Через 5 дней найдены различия в цитограммах регионарных лимфоузлов. В подмышечном лимфоузле, регионарном к аллотрансплантату надпочечника, по-прежнему, увеличено количество лимфобластов, тучные клетки выявляются по Романовскому-Гимза, по Унна-Браше (0,1−0,2%), при окраске сафранином (0,2−0,4%). При окраске по Spicer большая часть гранул тучных клеток сафранинофильна. В подмышечном лимфоузле, регионарном к аллотрансплантату брыжеечного лимфоузла, наряду с лимфобластами отмечается выраженная плазмацитарная реакции (1,66%). Встречаются активные макрофаги, фагоцитирующие частицы поврежденных клеток. Тучные клетки хорошо выявляются по Романовскому-Гимза, по Унна-Браше и при окраске альциановым синим. При окраске по Spicer тучные клетки округлой формы, небольших размеров, содержащие в цитоплазме только альцианофильные гранулы (незрелые тучные клетки).

Только через 7 дней после операции в регионарном к аллотрансплантату надпочечника лимфоузле появляется выраженная плазмоцитарная реакция (1,24%), уменьшено количество лимфобластов. В части тучных клеток отмечается дегрануляция. Они хорошо выявляются по Романовскому-Гимза, Унна-Браше и альциановым синим. При окраске по Spicer большая часть гранул тучных клеток альцианофильна (1 и 2 типы тучных клеток). Через 7 дней в подмышечном лимфоузле, регионарном к аллотрансплантату лимфоузлу, также заметно снижение количество лимфобластатов, умеренная плазмоцитарная реакция (0,88%). Тучные клетки плохо выявляются при окраске по Романовскому-Гимза, по Spicer, по Унна-Браше, лучше при окраске сафранином. При окраске по Spicer преобладают клетки 3 типа, встречаются также 4 тип тучных клеток.

Результаты проведенных экспериментов свидетельствуют о том, что первичный иммунологический ответ на аллотрансплантаты надпочечника и лимфоузла одинаков. Разница проявляется только на 5 сутки, что выражается в более раннем появлении при аллотрансплантации лимфоузлов плазмоцитарной реакции и незрелых альцианофильных тучных клеток в регионарном лимфоузле. Тучные клетки, являющиеся биологическими регуляторами тканевого гомеостаза, не могут не реагировать на поступление чужеродного антигена. Степень выявляемости тучных клеток зависит не столько от применяемых методик окраски, сколько от функциональной стадии развития последних.