Содержание работы. 
Видеоцифровая регистрация для иммунологических и биохимических исследований в практике клинической лабораторной диагностики

Материалы и методы исследований Контрольные материалы, образцы мочи, крови и сывороток были предоставлены ООО «КДЛ — тест» г. Москвы (всего более 12 000 образцов от 8860 пациентов, проходивших плановое или динамическое обследование).

Изображения аналитических объектов (96-луночных плоскодонных и круглодонных микропланшетов, разработанных микропланшетов формата 3×4, матричных объектов формата 5×6) в режиме светопропускания получали с помощью сканера «Epson Perfection-4990 Photo» («Epson», Япония), а изображения матричных дот-объектов и иммунохроматографических тест-полосок в режиме отражения получали как с помощью сканера, так и с использованием рефлектометра «Рефлеком» (ООО «Синтэко-Комплекс», Россия.).

В реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) с видеоцифровой регистрацией на наличие антител к Treponema pallidum было исследовано 9964 образца сыворотки. 96 проб параллельно тестировались в реакции Treponema pallidum particle agglutination (TPPA).

Аналитические характеристики программно-аппаратного комплекса при регистрации результатов иммуноферментного анализа (ИФА) исследованы на 1317 образцах сывороток (определение антител к ТПО и ТГ, ТТГ, общего ПСА, свободного тироксина, трийодтиронина, ДЕА-S, антител к Chlamidia trachomatis класса G, HBsAg). При постановке иммунологических реакций применяли коммерческие тест-системы.

Для разработки технологии проведения реакции латексагглютинации (ЛА) и изосерологических исследований в формате 8×12 с видеоцифровой регистрацией результатов было отобрано 460 сывороток пациентов с известным содержанием СРБ, РФ, АСЛО и 201 образец цельной крови с установленной группой крови соответственно.

Для формирования матриц микрокапель исследуемых образцов или реагентов на планарных носителях использовали разработанные нами аппликаторы со стальными пинами различной толщины.

Серийный анализ глюкозы методом «сухой химии» проводили, нанося на мембрану «Меридиан» (фирма «NDP», Австралия), помещенную на специальный носитель, образцы сыворотки крови с помощью разработанного 30-пинового аппликатора.

Серийное определение альбумина в моче проводили, нанося 30-пиновым аппликатором образцы мочи пациентов на нитроцеллюлозную мембрану «Schleicher & Schull» (Германия). После блокировки мембраны в растворе сухого молока проводили реакцию с генноинженерным рецептором или моноклональными антителами к альбумину, конъюгированными с пероксидазой хрена. Затем мембраны промывали буфером и помещали в субстратную смесь, содержащую диаминобензидин. Для калибровки применяли мочу с добавлением известных количеств сухого альбумина человека.

Серийные исследования факторов ревматоидной тройки (СРБ, РФ, АСЛО) проводили, используя латексные реагенты «BioScience» (Франция), «BioSystems» (Испания). 30-пиновым аппликатором забирали микрокапли (0,3−0,5 мкл) латексной суспензии и образцов двукратных разведений тестируемой сыворотки и контролей из соответствующих микропланшетов. С помощью системы позиционирования-смешивания помещали их последовательно на носитель в виде упорядоченной матрицы точек и перемешивали. Контроль воспроизводимости и чувствительности разработанных методов осуществляли с помощью контрольных сывороточных аттестованных образцов фирмы «Randox» и «DiaSis».

Оценку аналитических характеристик матричных микрометодов определения: — аналитов ревматоидной тройки в тестах ЛА производили в ходе исследований 119 образцов сыворотки крови, — концентрации глюкозы в сыворотке и цельной крови при исследованиях 340 образцов и 37 образцов соответственно, — серийного определения содержания альбумина в моче в ходе исследований 67 образцов.

Серийные и мультиплексные исследования групп крови проводились с цоликлонами анти-А, анти-В и анти-D-супер фирмы «Медиклон» (Россия). Суспензию эритроцитов (или образцы крови) и цоликлоны (исследуемые сыворотки и стандартные эритроциты — для перекрестного метода) аппликаторами наносили на стекло и перемешивали.

Иммунохроматографические тесты для определения простатического специфического антигена (ПСА) различных фирм («Alfa Scientific Design» США, Medical" ЮАР и др.) использовали в сочетании с разработанной системой видеорегистрации. В качестве образцов для иммунохроматографического определения ПСА использовали 207 сывороток крови пациентов с заболеваниями предстательной железы, проходивших обследование по городской программе скрининга мужчин старше 40 лет, а также 169 сывороток здоровых мужчин.

Статистическую обработку результатов проводили с помощью программы"STATISTICA-6 for WINDOWS" и MS Exell с учетом характера распределения и применением параметрических и непараметрических критериев.