Культивирование ВКЧС. 
Классическая чума свиней. 
Особенности проявления и специфическая профилактика

Метод культивирования вируса в лабораторных условиях на неиммунных свиньях дорог и небезопасен.

Большинство используемых в настоящее время живых вакцин против КЧС выращивают в культурах клеток, наряду с производством вакцин получаемых путем размножения вируса в организме кроликов.

Культивирование ВКЧС in vivo и в культуре клеток описывают многие исследователи [1, 8, 23, 37, 51, 42, 52, 9, 4, 20, 55, 28, 21, 47, 54, 27].

Первые исследования по получению и размножению вакцинных штаммов вируса КЧС в клеточных культурах для изготовления вакцины были проведены в СССР и завершены в 1967 г. [47].

Особенностью размножения вируса чумы свиней в КК является отсутствие цитопатических изменений в зараженных клетках, относительно невысокие урожаи вируса, относительно ограниченный спектр восприимчивых клеток.

Для культивирования эпизоотических и аттенуированных адаптированных вакцинных штаммов применяют первичные и различные субкультуры клеток. Приемлемые результаты накопления вируса получены в перевиваемых линиях клеток почек свиней РК-15. При 39−40°С вирулентные штаммы в этой культуре клеток активно репродуцируются, образуя большие флюоресцирующие участки клеток. Вакцинные штаммы образуют небольшие флюоресцирующие участки клеток медленно размножаясь при 33−34 єС. В культуре клеток РК-15 титр вируса достигает 107−108 БОЕ/мл и цикл репликации длится 15−16 ч. Вакцинный шт. ЛК-ВНИИВВиМ максимально накапливался только на 4−5-е сутки и титр его был одинаков. Максимальные титры вируса (шт. Ши-Мынь) в культуре клеток РК-15 отмечали на 2−5-е сутки (5,25−6,26 lg ИД50/мл). Шт. ЛК-К ВКЧС накапливался в суспензионной культуре клеток ПСГК до 5−7 lg ККИД 50/мл. Оптимальным методом выращивания культурального вируса (шт. ЛК-ВНИИВВиМ и Ши-Мынь) оказалась роллерная технология.

Большая часть вновь образующегося вируса связана с клетками или адсорбирована на них, и только 1% инфекционных вирионов находится в жидкой фазе.

ГАи гемадсорбирующие свойства ВКЧС — не установлены.

Вирус хорошо репродуцируется в культуре клеток почки мини-свиней (ПМС), в первичных клетках костного мозга (КМС), лимфоцитах, легких, селезенке свиней и тестикул ягнят (ТЯ). Культура лейкоцитов свиней более чувствительна к вирусу, чем РК-15. Оптимальный возраст культуры свиных лейкоцитов колеблется от 1 до 5 суток. Максимального уровня титр вируса достигает на 4−8 сутки после заражения. Уровень репродукции различных штаммов вируса в культурах макрофагов интактных и иммунизированных поросят одинаков. Установлена корреляция между вирулентностью штаммов ВКЧС и их способностью размножаться в культуре альвеолярных макрофагов. Вирус так же размножается в культуре клеток тестикул поросят, вызывая ЦПД при использовании аргинин буферной среды. Разработаны методы культивирования ВКЧС в КК лимфомы свиней [66, 43], в суспензионной КК почки свиней линии SК-6, [68, 47], на РК-65, выращенных на микроносителе цитодекс-3 [59], на первичной КК почки эмбрионов свиньи, на КК эмбриона кролика (ПЭКр), на линии клеток почки кроликов РК13 [65, 47], на первичной КК почки ягнят. Стабильные линии клеток почек 1,5-месячных поросят из благополучного по КЧС хозяйства — оказались чувствительными к вакцинному (шт. ЛК-ВНИИВВиМ) и эпизоотическому (шт. Ши-Мынь) штаммам.

Установлена возможность культивирования штамма «Синлак» ВКЧС в перевиваемых культурах клеток несвиного происхождения Vero и ГК (роллерным способом), а также в культуре клеток невриномы гассерова узла крысы (НГУК-1), что позволяет накапливать вирус в этой системе до 6,5−7 lg ИД50/мл без риска контаминации персистирующим вирусом КЧС, обнаруженным в свиных культурах.

Вирулентные штаммы размножаются в условиях одиночного цикла (one step cycle) роста только при повышенной температуре (39−40°С), оптимальной является температура 39 °C. Аналогичные штаммы хорошо размножаются in vitro и при температуре 37 °C.

Только аттенуированные штаммы способны размножаться при 22 °C, поэтому их репродукция in vitro может лимитироваться относительно высокой температурой тела свиней.

Установлена пестивирусная контаминация некоторых перевиваемых культур свиного происхождения, в частности, перевиваемой культуры клеток ППК-666. Изучено накопление персистирующего вируса-контаминанта КЧС и разработана методика деконтаминации культуры клеток ППК-666 путем культивирования монослоя клеток с сывороткой крови, содержащей высокие дозы ВНА, а также клонированием и реклонированием культуры клеток.

Заражение гемопоэтических клеток костного мозга приводит к усилению апоптоза и некроза, в основном неинфицированных клеток особенно внутри линии гранулоцитов. Основная роль в индукции апоптоза принадлежит контакту между инфицированными и неинфицированными клетками, так как в индукции апоптоза не выявлено участия макрофагов, фибробластов и растворимых факторов, типа цитокинов, а также реакционноспособного кислорода. Это указывает на непрямой механизм апоптоза.

Обычные коммерческие сборные нормальные сыворотки крупного рогатого скота постоянно содержат антитела к пестивирусам в титрах 1:4−1:10 и 40% сывороток овец также не пригодны для культивирования ВКЧС по этой причине. Обработка таких сывороток полиэтиленгликолем позволяет освободиться от этих антител. Очищенные сыворотки обладают повышенными ростовыми качествами, поэтому их можно вносить в культуральные среды в меньшем количестве (не более 5%).

Инфекционные титры воспроизводимы и могут быть определены уже через 24 ч после инфицирования культуры. Определить инфекционную активность вируса можно методом флюоресцирующих бляшек. Разработан метод титрования вируса путем учета негативных колоний под агаровым покрытием. Подобраны три линии клеток, формирующих негативные колонии при культивировании в монослое: РК15, RРД10 и RPTY. Предложен также метод титрования ВКЧС в культуре клеток с помощью феномена экзальтации. Вначале культуру инфицируют ВКЧС, а затем (через определенное время) — вирусом НБ — шт. Миадера (вирусом болезни Тешена). Клетки, в которых размножился ВКЧС, под влиянием вируса НБ разрушаются (ЦПД), тогда как клетки, зараженные одним ВКЧС, не изменяются. Кроме того, предложен тест экзальтации гемагглютинации и ингибиции ЦПЭ с использованием клеток почки свиней и вируса НБ — шт. Сато (один из штаммов вируса гриппа). Здесь цитопатогенный вирус ингибируется в результате предварительной инокуляции ВКЧС; эта ингибиция сопровождается значительным увеличением образования ГА вируса НБ.