Методика анализа жизнеспособности клеток

Для изучения биологического эффекта действия ионизирующего излучения определялось жизнеспособность клеток в клеточной культуре при помощи микроскопа МБИ-15 и камеры Горяева.

Универсальный исследовательский биологический микроскоп МБИ-15 предназначается для визуального наблюдения и фотографирования объектов в проходящем и падающем свете. В состав каждого микроскопа входят наборы объективов, окуляров, фотоокуляров и принадлежностей.

Микроскоп может применяться для исследований в области биологии, ботаники, зоологии, а также в других областях науки и техники.

Счетные камеры используются для подсчета крупных объектов — дрожжей, одноклеточных водорослей, конидий грибов и некоторых относительно крупных бактерий. Состоит из толстого предметного стекла, имеющего прямоугольное углубление (камеру) с нанесенной микроскопической сеткой и тонкого покровного стекла. Камера разработана профессором Казанского университета Горяевым Н. К. Благодаря увеличенному объему сетки, отличается большей точностью подсчета, по сравнению с другими камерами.

Для того чтобы отличить живые клетки от мертвых, использовалась методика окрашивания. Метиленовая синь имеет способность присоединяться к молекулам кислот, таких, как, например, содержащаяся в клетках дрожжей дезоксирибонуклеиновая кислота (ДНК). При этом живые клетки дрожжей способны разлагать метиленовую синь, проникшую через клеточную мембрану. В результате мертвые клетки окрасятся в синий цвет, а живые не окрасятся. Поскольку метиленовая синь токсична для клеток, ее концентрация была ниже 0,1%, и после того, как дрожжевые клетки были окрашены, они подсчитаны в течение получаса.

Обработку результатов проводили в программном пакете «MicrosoftExcel». Вычислялось среднеквадратическое отклонение полученных значений.