Культивирование Бифидумбактерий. 
Пробиотики. 
Бифидумбактерин. 
Схема технологического производства препарата сухого

ТП-5 Культивирование Бифидумбактерий .

ТП-5.1.Получение культуры II поколения

Культуру и генерации из баллона пересевают в стерильные баллоны, в которых содержится по 17,7 л стерильной среды, тщательно перемешивают, закрывают ватно-марлевой пробкой и инкубируют в термостатный комнате при температуре (38±1)°С в течение 46−48 часов при тщательном перемешивании городу емкости 3 раза в день.

Остатки культуры и генерации из емкости контролируют отсутствие посторонней микрофлоры методом посева по 0,005 мл или 0,01 мл на одну чашку Петри с МПА и на одну чашку Петри со средой Сабуро. Посевы на МПА инкубируют в термостате при температуре (38±1)єС на протяжении 48 часов. Посевы на среде Сабуро инкубируют при температуре (22±1)°С в течение 72 часов. После окончания инкубации на чашках Петри должен отсутствовать рост посторонних микроорганизмов.

Чистую культуру II генерации в баллонах в объеме 15,51 л передают на операцию Получение нативной микробной массы (III поколение).

ТП-5.2. Получение нативной микробной взвеси (III генерация)

Выращивание бифидобактерий проводят в биореакторе емкостью 250 л. Перед началом работы его стерилизуют паром. Режим стерилизации: температура 138±1°С — 20 минут или температура 121−125°С — 45 минут.

В простерилизованные, охлажденный биореактор через специальный сифон вакуумом загружают стерильную среду. Объем загруженного питательной среды — 90 л.

Питательная среда повторно стерилизуют в биореакторе при температуре 110 °C в течение 30 минут, путем подачи пара в рубашку аппарата. После охлаждения простерилизованного среды до температуры культивирования (38±1)°С в асептических условиях отбирают стерильную пробу для контроля стерильности питательной среды.

Засев питательной среды осуществляется при температуре (38±1)°С.

Процесс культивирования бифидобактерий в биореакторе длится 6−8 часов под аргоновой подушкой. Пробы культуральной жидкости из аппарата отбирают через каждые 2 часа для определения оптической плотности, специфической активности, проверки значений рН и для контроля чистоты культуральной жидкости. После засева питательной среды в процессе выращивания необходимо:

• · Следить за температурой культивирования (38±1)°С;
• · Давление в аппарате поддерживать в пределах 0,03 -0,04 МПа;
• · Мешалку в аппарате включать на несколько минут (2−3 минуты) только перед отбором проб и после подачи 5% раствора аммиака, частота перемешивания 70−100 о6/хв;
• · РН в аппарате поддерживать в пределах 6,3−6,5, корректируя 5% раствором аммиака.

Замер рН и температуры в аппарате производится автоматически. По окончании процесса культивирования показатель рН устанавливают в пределах 6,3−6,5, после чего микробную суспензию охлаждают подачей холодной водопроводной воды в рубашку аппарата.

Остатки культуры II генерации из емкости контролируют отсутствие посторонней микрофлоры методом посева по 0, 05 мл или 0,01 мл на одну чашку Петри с МПА и на одну чашку Петри со средой Сабуро. Посевы на МПА инкубируют в термостате при температуре 38±1°С в течение 48 часов. Посевы на среде Сабуро инкубируют при температуре (22±1)°С в течение 72 часов. После окончания инкубации на чашках Петри должен отсутствовать рост посторонних микроорганизмов.

Контролируют специфическую активность остатков культуры II генерации из емкости путем посева в 9 пробирок, содержащих по 9 мл бифидум среды. 1 мл остатков культуры II генерации вносят в первую пробирку с 9 мл бифидум среды-это первое разведение 10−1. Полученное разведение тщательно перемешивают путем 12−15-кратного покачивания пробирки. С этой пробирки делают последовательные десятикратные разведения до 10−9. Посевы термостате при температуре (38±1)°С в течение 96 часов. После окончания инкубации в разведении 10−6 должен наблюдаться рост колоний бифидобактерий в виде «гвоздей», «крох» и «нитей» .

По окончании процесса культивирования микробную взвесь с биореактора сливают в стерильные баллоны емкостью 16 л.

Для получения одной серии готовой продукции формируется по загрузке в лиофильной сушки ТГ-50, 12,5 л микробной суспензии передают на стадию Получение производственной культуры. Микробную взвесь, которая осталась, хранят в холодильной камере при температуре (3−4)°С до следующей операции сушки.

Ферментер после слива микробной взвеси заполняют очищенной водой, которую нагревают до 100 °C и выдерживают в течение 30 минут, после чего с помощью сжатого воздуха сливают в канализацию промышленных стоков. Пропарка пустой ферментера проводят в течение 15 минут Технологический процесс ведут в помещении VI «Помещение получения производственных культур» класса чистоты В и в помещении VII «Термостатная комната» класса чистоты В.

Производственная серия бифидумбактерина формируется на стадии Получение производственной культуры, на которой серии присваивается порядковый номер. Производственная серия составляет в общем объеме 81,6 л производственной культуры.

Нативную микробную взвесь в количестве 12,5 л из баллона в асептических условиях разливают по 2 л в стерильные баллоны. В каждый баллон с нативной микробной взвесью добавляют через сифон вносят по 2,7 л стерильного сахарозо-желатиновые среды (СЖС). Тщательно перемешивают. Доводят 5% раствором аммиака рН до 6,0 — 6,5. В баллон через сифон вносят 9,0 л стерильного молока. Тщательно перемешивают. Измеряют рН полученной производственной культуры и, при необходимости, доводят 5% раствором аммиака: рН до 6,0 — 6,5. Объемное соотношение компонентов производственной культуры должно быть следующим: 14,6% биомассы: 19,7% СЖС: 65,7% молока.

Остатки культуры III поколения из емкости контролируют на отсутствие посторонней микрофлоры методом посева по 0, 05 мл или 0,01 мл на одну чашку Петри с МПА и на одну чашку Петри со средой Сабуро.

Посевы на МПА инкубируют в термостате при температуре 38 °C в течение 48 часов. Посевы на среде Сабуро инкубируют при температуре 22єС в течение 72 часов. После окончания инкубации на чашках Петри должен отсутствовать рост посторонних микроорганизмов.

Контролируют специфическую активность остатков культуры III генерации из емкости путем посева в 9 пробирок, содержащих по 9 мл бифидум среды. 1 мл остатков культуры III поколения вносят в первую пробирку с 9 мл бифидум среды — это первое разведение 10−1. Полученное разведение тщательно перемешивают путем 12−15-кратного покачивания пробирки. С этой пробирки делают последовательные десятикратные разведения до 10−9. Посевы термостате при температуре (38±1)°С в течение 96 часов. После окончания инкубации в разведении 10−8 должен наблюдаться рост колоний бифидобактерий в виде «гвоздей», «крох» и «нитей» .

Чистую производственную культуру в баллонах в объеме 81,6 передают на стадию «Стерильный розлив производственной культуры» .