Эксперименты на животных

В экспериментах использовали самцов белых аутбредных мышей линии CD1 весом 20−25 г в возрасте 1.5 — 2 месяцев (Пущино, Россия).

Все эксперименты с животными осуществлялись в соответствии с требованиями комиссии ИФАВ РАН по биоэтике и «Правилам лабораторной практики» (Приказ Минздравсоцразвития России от 23 августа 2010 г. № 708н). При исследовании дозозависимого ингибирования АХЭ, БХЭ, КЭ и НТЭ крови и мозге мышей исследуемые соединения растворяли в DMSO и вводили животным однократно внутрибрюшинно (в/бр) в 5−10 возрастающих дозах в объеме около 0.1 мл. diPr-DClVP вводили на фоне предварительного (за 20 мин) введения атропина-сульфата (20 мг/кг). Для каждой дозы использовали не менее 6 животных.

Контрольные животные получали только DMSO или DMSO + атропин-сульфат в случае diPr-DClVP. Предварительные эксперименты показали, что при в/бр введении максимальное ингибирование эстераз крови достигается через 0.5−1 час после введения. Основываясь на этих данных, мышей умерщвляли через 1 час после введения исследуемых соединения (декапитация в условиях CO2-анестезии). Забор крови и мозга у мышей проводили, как описано выше в Главе 2.4.

Определение острой токсичности соединений было выполнено на самцах белых аутбредных мышей весом 20−25 г при в/бр введении: 5−7 доз для каждого соединения, 6−8 животных для каждой дозы. Срок наблюдения — 24 часа. Величины LD50 вычисляли методом пробит-анализа с использованием программы BioStat 2006 Professional (AnalystSoft, Alexandria, VA).

Статистическая обработка и анализ результатов проводились с использованием программы GraphPad Prism 3.02 (GraphPad Software, San Diego, CA). Результаты представлены как means ± SEM. Графики зависимостей, регрессионный анализ, корреляции получены с помощью программы Origin 6.1 (OriginLab Corp., Northampton, MA).

Как было отмечено во Введении, эстеразный профиль соединения — это набор кинетических констант, описывающих его ингибиторную активность в отношении эстераз различной функциональной значимости: АХЭ, НТЭ, БХЭ и КЭ. Ранее в нашей лаборатории были определены кинетические константы ингибирования для большого массива ФОС различных структурных классов, проанализированы закономерности структура-ингибиторная активность и структура-ингибиторная селективность с использованием методов QSAR [63, 64, 455, 471−473] и предложена новая методология прогнозирования терапевтических и токсических эффектов ингибиторов холинэстераз посредством анализа их эстеразного профиля. Настоящая работа является продолжением и развитием исследований в данном направлении.